[發明專利]與大豆抗疫病基因緊密連鎖的分子標記CAPs1516及其應用

有效

• 申請號: 201710153876.3
• 申請日: 2017-03-15
• 公開（公告）號: CN107058519B
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 朱振東;鐘超;孫素麗
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.與大豆抗疫病基因RpsHC18緊密連鎖的分子標記CAPs1516，其特征在于，所述分子標記核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，該標記片段大小為541bp，所述分子標記適用于大豆華春18及其衍生大豆品種。

2.一種用于擴增權利要求1所述分子標記的引物對，其特征在于，所述引物對為：

上游引物F：5'-AAGTGCAACGGACTGCCTTT-3’；

下游引物R：5'-CATCAGGGTTGTCCAGGAATGA-3'。

3.權利要求1所述的分子標記在鑒定抗疫病大豆品種中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測大豆的基因組DNA；

2)以待測大豆的基因組DNA為模板，利用權利要求2所述引物對進行PCR擴增反應；

3)檢測PCR擴增產物，如果能夠擴增出541bp的產物，則將PCR產物使用限制性內切酶BcLI切割，根據酶切結果判定該材料中是否含有抗疫病基因RpsHC18。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，若經酶切后只獲得69bp和472bp兩個片段，則判定該材料含有抗疫病基因RpsHC18。

6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟2)中PCR擴增反應使用的擴增體系以10μl計為：大豆基因組DNA模板濃度2ng/μl，2×PCR MasterMix 4μl，引物F和R各0.2μmol/L，用ddH₂O補足至10μl。

7.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟2)中PCR擴增反應使用的反應條件為：95℃3分鐘；94℃45秒，58.4℃45秒，72℃45秒，共40個循環；72℃10分鐘。

8.一種檢測抗疫病大豆的PCR試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有權利要求2所述的引物對與限制性內切酶BcLI。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液、限制性內切酶標準陽性模板中的一種或多種。

10.權利要求1所述的分子標記CAPs1516在大豆抗疫病分子育種中的應用。