[發明專利]一種快速測定飼料添加劑中6種大豆異黃酮的方法

在審

• 申請號: 201710150566.6
• 申請日: 2017-03-14
• 公開（公告）號: CN107102069A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 羅瑩瑩;于懷龍
• 申請（專利權）人: 上海優久生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速測定飼料添加劑中6種大豆異黃酮的方法，所述6種大豆異黃酮分別為黃豆黃素、黃豆黃苷、大豆苷元、大豆苷、染料木素及染料木苷，其特征在于：按照下述步驟進行：

A、選擇6種大豆異黃酮的標準品如下：黃豆黃素、黃豆黃苷、大豆苷元、大豆苷、染料木素及染料木苷的標準品；

B、標準品配制：分別稱取大豆苷、黃豆黃苷、染料木苷、大豆苷元、黃豆黃素和染料木素6種標準品各5mg，4mg，5mg，5mg，4mg，5mg，精確到0.01mg，6種標準品中分別加80％乙醇溶解定容至50mL，100mL，50mL，50mL，100mL和50mL，分別配制成濃度為100mg/L，40mg/L，100mg/L,100mg/L，40mg/L和100mg/L作為標準品母液；

C、從步驟B中得到的6種標準品母液中分別稱取大豆苷母液1mL、黃豆黃苷母液2mL、染料木苷母液1mL、大豆苷元母液1mL、黃豆黃素母液2mL和染料木素母液1mL配制成混標，濃度分別為12.5mg/L，10mg/L，12.5mg/L，12.5mg/L，10mg/L和12.5mg/L，作為標準品溶液，供上機用；

D、樣品前處理：精密稱定大豆異黃酮供試品0.1g，精確到0.0001g，加入80％乙醇約80mL，超聲波加熱助溶30min，冷卻后再用80％乙醇定容在100mL容量瓶中，取部分混勻后的溶液，以4000r/min離心5min，取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾即為待測樣品，等待進樣，同一樣品測兩次平行；

E、色譜條件：色譜柱：Athena—C18(4.6*150mm,5μm)，流動相A為0.1％乙酸水溶液，流動相B為0.1％乙酸乙腈溶液，流動相采用梯度洗脫程序：0min：90％A+10％B；12.5min：70％A+30％B；17.5min：60％A+40％B；18.5min：100％B；21min：100％B；22.5min：90％A+10％B；26.5min：90％A+10％B；30min：90％A+10％B；流速1mL/min，柱溫40℃，紫外檢測波長254nm；進樣量10μL，運行時間30min；

F、通過外標法進行計算，得出樣品溶液中大豆苷、黃豆黃苷、染料木苷、大豆苷元、黃豆黃素和染料木素的含量。

2.根據權利要求1所述的一種快速測定飼料添加劑中6種大豆異黃酮的方法，其特征在于：所述方法應用于動物飼料添加劑產品中6種大豆異黃酮的檢測。