[發明專利]一種栝樓SCAR分子標記及應用

有效

• 申請號: 201710141113.7
• 申請日: 2017-03-10
• 公開（公告）號: CN106755543B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 曹亮;黃艷寧;朱校奇;彭斯文;謝進;徐瑞;劉朝暉
• 申請（專利權）人: 湖南省農業生物資源利用研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬分子技術領域，具體涉及一種栝樓SCAR分子標記及應用。所述的栝樓SCAR分子標記引物為SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.6所示。利用本發明提供的引物或序列，可對栝樓屬的不同品種，以及栝樓屬和非栝樓屬進行準確鑒定，該引物可應用到栝樓種苗的快速鑒別中，對于瓜蔞的安全用藥，規范藥材市場管理也有著極大的作用。

技術領域

本發明涉及分子技術領域，具體涉及一種栝樓SCAR分子標記及應用。

背景技術

瓜蔞子為葫蘆科植物栝樓Trichosanthes kirilowii Maxim.或雙邊栝樓Trichosanthes r osthornii Harms的干燥成熟種子。秋季采摘成熟果實，剖開，取出種子，洗凈，曬干。性甘，寒。歸肺、胃、大腸經。潤肺化痰，滑腸通便。用于燥咳痰黏，腸燥便秘。目前各地栝樓栽培除了少量作為藥用外，其余大部分是以籽用為主，瓜蔞子含有豐富的功能性蛋白質等成分，具有良好的降血糖、抗腫瘤等保健藥用價值，瓜蔞子在炒制加工后可作為休閑食品使用，稱為“吊瓜子，”作為一種特色瓜子資源，受到廣大消費者的喜愛，由此催生了大面積的以瓜蔞子生產為目的的栝樓栽培產業，并在全國形成了一批一定規模的吊瓜子專業生產合作社，特別在浙江、山東、江西、湖南等地種植面積較大。

目前國內的主流籽用栝樓其來源種為雙邊栝樓，在湖南、江西地區廣泛栽培，面積超過10萬畝，雙邊栝樓籽粒較大，長橢圓形，類似葵花籽，易于剝開食用，受到廣大消費者的青睞，各種植基地也紛紛發展雙邊栝樓的種植。但是栝樓來源品種廣泛，據《中國植物志》記載我國栝樓有34種，全世界范圍內有80余種。由于栝樓形態差別較小，不同環境對表型也存在一定的影響，因此，對其分類鑒定具有極大挑戰，其分類學研究也一直具有一些爭議。而在栝樓栽培中，由于不同種源的栝樓種苗其形態特征差異較小，在引種栽培時很難區分優良種，導致一些種植基地在引種過程中引入一些不適宜籽用的品種，導致經濟損失。因此開發栝樓種苗的鑒定技術，用于種苗的選擇栽培，具有極大的應用價值。

瓜蔞皮、瓜蔞子、天花粉是大宗常用中藥，藥典記載的來源品種只有兩個，分別是栝樓和雙邊栝樓，但在市場上，常常出現一些栝樓屬其它品種作為藥材使用的情況。據樂崇熙等調查研究發現我國瓜蔞皮的主流商品為栝樓或雙邊栝樓的果皮，主要混淆品為湖北栝樓T.hupehensis的果皮，此外還有10多種同屬或其它科屬來源的混淆品?？梢姡瑢鲜V藥材來源的穩定可靠的鑒定也很重要，DNA分子，只與植物品種來源有關，不受環境及植物形態的影響，因此很適合作為藥材來源種的鑒定，因此，開發基于DNA分子的瓜蔞藥材來源鑒定手段，對于安全用藥，規范藥材市場管理也有著極大的作用。

針對上述問題，申請人通過SRAP分子標記的研究，找出栝樓屬品種間差異條帶，繼而開發針對差異條帶的SCAR標記引物，這種標記引物能穩定的鑒別栝樓的不同品種，并成功的將其應用到種苗的快速鑒別中。DNA分子技術應用于栝樓種苗鑒定目前還沒有相關報道。

發明內容

發明的目的在于提供了一種栝樓SCAR分子標記引物，所述的引物為：F1:5’-CCCGTA GCT GCA CTC TCA TC-3’，R1:5’-CCC CGT GCT TCG GGA ATT AT-3’；F2:5’-TCC AAACCG GAA ATA GGG GC-3’，R2:5’-TGA CTG CGT ACG AAT TGA CA-3’；和F3:5’-CGG GAG TTGATC GTG GCA T-3’，R3:5’-TCC AAA CCG GAA ACT GTG GT-3’。

本發明的另一個目的在于提供了一種栝樓SCAR分子標記引物在栝樓品種鑒定中的應用，利用本發明提供引物對待測植株進行鑒定，成本低，能有效降低引種風險，保障栝樓種苗的質量或者可以確定瓜蔞藥材的來源品種，從而實現瓜蔞藥材的真偽鑒別。

本發明的最后一個目的在于提供了栝樓鑒別的SCAR分子片段序列，如下：

栝樓屬通用SCAR片段：