[發(fā)明專利]耐除草劑大豆SHZD32?1及其衍生品種的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710119878.0 | 申請(qǐng)日： | 2017-03-01 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN106636445A | 公開（公告）日： | 2017-05-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 徐俊鋒;汪小福;陳笑蕓;魏巍;徐曉麗;彭城 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/68 | 分類號(hào)： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京思元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11598 | 代理人： | 余光軍,霍雪梅 |
| 地址： | 310021 浙江省杭*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 除草劑 大豆 shzd32 及其 衍生 品種 實(shí)時(shí) 熒光 定性 pcr 檢測(cè) 方法 | ||
1.用于檢測(cè)耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)引物對(duì)和探針，其特征在于：
所述引物對(duì)為由核苷酸序列為SEQ ID No.1所示的正向引物和SEQ ID No.2所示的反向引物組成的引物對(duì)1；所述探針為核苷酸序列為SEQ ID No.3所示的探針1；或者，
所述引物對(duì)為由核苷酸序列為SEQ ID No.4所示的正向引物和SEQ ID No.5所示的反向引物組成的引物對(duì)2；所述探針為核苷酸序列為SEQ ID No.6所示的探針2。
2.權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)引物對(duì)和探針在檢測(cè)耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種中的應(yīng)用。
3.一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)提取待檢測(cè)大豆樣品的DNA；(2)以提取的DNA為模板，以權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)引物對(duì)和探針建立PCR擴(kuò)增體系并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增；(3)如果發(fā)生特異性擴(kuò)增，則待檢測(cè)的大豆樣品是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種；如果未發(fā)生特異性擴(kuò)增，則待檢測(cè)的大豆樣品不是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種。
4.一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)提取待檢測(cè)大豆樣品的DNA；(2)以提取的DNA為模板，以權(quán)利要求1所述的引物對(duì)1和探針1建立PCR擴(kuò)增體系并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增；(3)如果發(fā)生特異性擴(kuò)增，則待檢測(cè)的大豆樣品是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種；如果未發(fā)生特異性擴(kuò)增，則待檢測(cè)的大豆樣品不是耐除草劑大豆SHZD32-1或其衍生品種。
5.按照權(quán)利要求3或4所述的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增體系包括：反應(yīng)體系總體積為25.0μL，其中，10×PCR緩沖液2.5μL，25mmol/L氯化鎂溶液2.5μL，dNTPs混合溶液2.0μL，10μmol/L正向引物1.0μL，10μmol/L反向引物1.0μL，10μmol/L探針0.5μL，終濃度為0.025U/μL的Taq DNA聚合酶，25mg/L DNA模板2.0μL，余量為雙蒸水。
6.按照權(quán)利要求3或4所述的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)方法，其特征在于，所述實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增的程序包括：95℃變性5min；95℃變性15s，60℃退火延伸60s，循環(huán)數(shù)40。
7.一種耐除草劑大豆SHZD32-1及其衍生品種的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)試劑盒，包括：10×PCR緩沖液，氯化鎂溶液，dNTPs混合溶液，檢測(cè)引物對(duì)，探針，Taq DNA聚合酶和雙蒸水；其特征在于：所述檢測(cè)引物對(duì)、探針為權(quán)利要求1所述的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)引物對(duì)和探針。
8.按照權(quán)利要求7所述的實(shí)時(shí)熒光定性PCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述檢測(cè)引物對(duì)為權(quán)利要求1所述的引物對(duì)1，所述探針為權(quán)利要求1所述的探針1。
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