[發明專利]一種酶解法生產降血糖肽過程的實時監控方法

有效

• 申請號: 201710110333.3
• 申請日: 2017-02-27
• 公開（公告）號: CN106967785B
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 顏輝;朱勝虎;余永建;熊孟;賈俊強;江明珠
• 申請（專利權）人: 江蘇科技大學
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;G01N21/65
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 黃天天

1.一種酶解法生產降血糖肽過程的實時監控方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）采用旁路設置石英流動比色池的方法檢測酶解液的拉曼光譜：

酶解反應池的酶解液通過泵由管路進入旁路的石英流動比色池，再經管路流回酶解反應池，激光光源經光纖耦合探頭照射在石英流動比色池內的酶解液上，拉曼信號也經光纖耦合探頭收集進入光譜儀，從而獲得酶解液的拉曼光譜；

（2）拉曼光譜數據的處理：

對拉曼光譜進行剪切，范圍1700~1645cm^-1，進行基線校正，采用二次多項式的平滑方法，窗口寬度5-11點；基線校正選擇Rubberband校正、基線點數48-64，傅立葉自退卷積選擇Lorentzian函數，其中，退卷積因子2、噪聲減低因子0.5，退卷積結束進行基線校正，基線校正的參數同上；譜線擬合在1700~1645cm^-1范圍內分配9-15個擬合峰進行擬合，最終獲得子峰，計算各子峰的面積；根據子峰的峰位，指認子峰所屬的二級結構，最終計算出α-helix、random-coil、β-sheet和β-turn的組成比例，指認的規則是：1650~1660cm^-1為α-helix，1660~1665cm^-1為random-coil，1665~1680cm^-1為β-sheet，1680~1700cm^-1為β-turn；

（3）建立二級結構組成比例與酶解蛋白抑制α-葡萄糖苷酶活性的模型：

采用非線性支持向量機（SVM）的方法，建立酶解液蛋白二級結構的組成與其抑制α-葡萄糖苷酶活性的非線性支持向量機模型，其中，非線性支持向量機采用高斯核函數，根據訓練集的留一法交叉驗證來優化獲得懲罰系數c、損失函數參數ε和高斯參數γ；

（4）對蛋白酶解液的α葡萄糖苷酶抑制率進行實時監控：

在酶解過程中，根據步驟（1）動態獲得酶解液的拉曼光譜，根據步驟(2)解析拉曼光譜，獲得蛋白二級結構的組成，通過步驟（3）獲得的非線性支持向量機模型，計算得到酶解液對α葡萄糖苷酶的抑制率，其中，所述的酶解液為麥胚蛋白酶解液。

2.根據權利要求1所述的實時監控方法，其特征在于，步驟（1）中激光光源的功率150W~300W。