[發(fā)明專利]一種亨利兜蘭的組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710108873.8
• 申請日: 2017-02-27
• 公開（公告）號: CN106718944B
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈瑞冬;葛紅;李秋香;張曉;周妍慧;徐玉鳳;王洪云;劉娜
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務(wù)所 11313
• 代理人: 王建秀;郗名悅

本發(fā)明提供了一種亨利兜蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，包括以下步驟：(1)自交授粉；(2)果莢采摘；(3)無菌播種；(4)增殖繼代培養(yǎng)；(5)生根壯苗培養(yǎng)；(6)生根苗移栽。本發(fā)明還提供了一種適于亨利兜蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基體系，包括萌發(fā)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根壯苗培養(yǎng)基，其可用于上述亨利兜蘭組培快繁方法中。本發(fā)明另外還提供了亨利兜蘭果莢的最佳采摘期，即在亨利兜蘭自交后270?390左右采摘果莢。通過本發(fā)明的方法培養(yǎng)的種苗萌發(fā)率高、健壯、根系發(fā)達(dá)、生長周期短，同時，本發(fā)明的方法簡單易操作，生產(chǎn)成本低，為亨利兜蘭商業(yè)化生產(chǎn)提供了很好的基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種亨利兜蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的方法、一種適于亨利兜蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基體系以及一種確定亨利兜蘭果莢最佳采集期的方法。

背景技術(shù)

兜蘭屬(Paphiopedilum)是蘭科觀賞價值最高的屬之一，是繼蝴蝶蘭、大花蕙蘭、文心蘭之后的一個新興蘭花。近年來在各類花展中，兜蘭屬花卉頻繁出現(xiàn)并多次獲得大獎。兜蘭在花卉市場上作為高檔盆花也為越來越多的人所喜愛。兜蘭原生種主要分布于西南和南部的熱帶與亞熱帶地區(qū)，以云南、廣西和貴州分布最多。

亨利兜蘭(Paphiopedilum henryanum)原產(chǎn)我國廣西、貴州等地，葉片翠綠，花可愛秀美，觀賞價值高。由于近年來日益惡劣的生態(tài)環(huán)境、自身特殊的生物學(xué)特性以及人們的過度性采挖，野生亨利兜蘭已經(jīng)難覓蹤跡。據(jù)發(fā)明人2012年-2016年間多次進(jìn)行的野外考察，僅在云南文山和越南交界的地方見到原始居群。因此應(yīng)加強(qiáng)亨利兜蘭的保護(hù)工作，尤其要開展亨利兜蘭的繁殖技術(shù)研究，以利益促保護(hù)，減少野外采挖破壞。

由于傳統(tǒng)的分株等方法繁殖系數(shù)低，費(fèi)時費(fèi)力，種子發(fā)育不全且沒有胚乳，蘭花多采用組培快繁的方法進(jìn)行繁殖。兜蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)難度極大(王代谷等，“貴州兜蘭屬植物的現(xiàn)狀及展望”,《安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)》,2009,37(6):2469-2470)，是蘭科中最難的屬之一。楊燕萍等以亨利兜蘭的側(cè)芽為材料進(jìn)行誘導(dǎo)和離體快繁實(shí)驗(yàn)，莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基以Heller+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+0.5g/L活性炭，在繼代培養(yǎng)中，試管苗在培養(yǎng)基1/2MS+0.2mg/L6-BA+2mg/L NAA+10％椰子汁+2g/L活性炭中叢生芽增殖為佳，增殖倍數(shù)為3.50，增殖系數(shù)有待提高(楊燕萍等，“亨利兜蘭莖尖誘導(dǎo)與離體快繁試驗(yàn)”，《農(nóng)業(yè)科技通訊》，2011，53-55)。曾宋君等(曾宋君等，“兜蘭無菌播種和組織培養(yǎng)研究進(jìn)展”,《園藝學(xué)報(bào)》,2007,34(3):793-796)以人工授粉后300天的兜蘭種子進(jìn)行無菌播種實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)播種于VW+1mg/L NAA+100ml/L椰子汁+1g/L活性炭培養(yǎng)基，萌發(fā)快，萌發(fā)率最高約50％。但是隨后停止生長并有大量原球莖死亡，需轉(zhuǎn)至另一種培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)，文中未提到增殖倍數(shù)。Lee等從亨利兜蘭授粉后60天開始取果莢，每隔30天取一次，一直到270天，發(fā)現(xiàn)授粉150天的果莢種子萌發(fā)率最高，達(dá)40％左右(YI Lee,“Asymbiotic Seed Germination of Six PaphiopedilumSpecies in Relation to the Time of Seed Collection and Seed Pretreatment”,Acta Horticulturae,2007,755(755):381-386)。可見，目前亨利兜蘭的組培快繁殖技術(shù)還不是很成熟。

因此，為了保護(hù)亨利兜蘭的野生資源同時滿足消費(fèi)者的需求，有必要提供一種亨利兜蘭的快速繁殖體系，以縮短其培養(yǎng)周期、提高種苗成活率和幼苗質(zhì)量、降低成本，從而滿足市場對這一觀賞花卉不斷增長的需求。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題和克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明提供了一種亨利兜蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的方法、一種適于亨利兜蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的培養(yǎng)基體系以及提供了亨利兜蘭果莢的最佳采集期。

本發(fā)明的第一方面提供了一種亨利兜蘭組織培養(yǎng)快速繁殖的方法，包括以下步驟：