[發明專利]汞離子食品污染中直接競爭酶聯免疫檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201710099835.0
• 申請日: 2017-02-23
• 公開（公告）號: CN106872692B
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發明（設計）人: 王秋霞;馬景周;歐長波;張艷紅;魏小兵;余燕;劉興友;姜金慶;秦保亮
• 申請（專利權）人: 河南科技學院;方城縣機電信息中等職業學校
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 代芳

本發明提供了一種基于直接競爭酶聯免疫法汞離子檢測試劑盒，包括：包被有羊抗鼠IgG二抗的檢測板，所述檢測板真空密封包裝；所述羊抗鼠IgG二抗的包被濃度為50～200μg/mL；質量濃度為20～50μg/mL的酶標Hg?ITCBE鰲合物半抗原；質量濃度為10～20μg/mL的抗汞離子單克隆抗體溶液；所述抗汞離子單克隆抗體溶液由Hg?ITCBE?cBSA免疫原免疫Balb/C小鼠制備而來；1.0～3.0mol/L的終止液；樣品稀釋液；底物顯色液；洗滌液；汞離子標準品溶液；質量濃度為10～20mg/mL的EDTA處理液。本發明提供試劑盒具有靈敏度高、特異性強的特點，同時具有檢測時間短的優點。

技術領域

本發明屬于環境檢測技術領域，具體涉及汞離子食品污染中直接競爭酶聯免疫檢測試劑盒及其應用。

背景技術

汞，俗稱水銀，是在常溫、常壓下唯一以液態存在的金屬。近現代社會的快速發展，汞越來越被廣泛應用于農業、工業、制藥業、冶金及牙科上，汞蒸汽和汞的化合物多有劇毒。伴隨著在各領域的應用，汞形成了大氣、水體和土壤的立體污染循環，并通過植物、魚類體內富集，再經過食物鏈進入人體，在肝、腎、腦等組織中再富集，抑制人體酶活性，擾亂正常新陳代謝，甚至造成畸形，嚴重威脅到人類健康和食品安全。由于Hg²⁺具有高度親電子性，所以對體內的最重要的巰基、羰基、羧基、羥基等活性基團均具有很強的攻擊力，從而使這些活性基團失去活性，對機體生理生化功能產生巨大影響。此外，有機汞中的甲基汞最容易透過胎盤，從母體轉移給胎兒，而胎兒對甲基汞具有很高的蓄積能力，由于胎盤轉移致使胎兒產生嚴重的胎兒性甲基汞中毒事例已經有多起報道。

慢性汞中毒主要癥狀表現為精神異常、齒齦炎、震顫和腎炎等；急性汞中毒主要表現為急性腐蝕性口腔炎和胃腸炎，嚴重時可發生急性腎功能衰竭、肝臟損害。皮膚接觸汞及其化合物可引起接觸性皮炎，具有變態反應性質。由于汞的污染和危害較大，我國制定了土壤、食品、水體、化妝品等涉汞領域中的國家限量標準，食品中牛乳汞允許量標準(GB2762-94)為≤0.01mg/Kg，地下水質量標準(GB7468-2012)中規定，主要適用于集中式生活用水水源及農田灌溉水的汞離子限量標準為≤0.01mg/L。

目前動物性食品及環境水樣中Hg²⁺污染的主要檢測方法包括傳統的理化檢驗和免疫學檢驗兩種類型的方法。理化檢驗包括紫外分光光度法(UV)、電化學分析法、原子吸收光譜法(AAS)、電感耦合等離子體質譜法(ICP-MS)、電感耦合等離子體原子發射光譜法(ICP-AES)、氫化物發生-原子熒光光譜法(HG-AFS)和中子活化分析法(NAA)等，它們是目前Hg²⁺污染檢測的主要方法，靈敏度高，結果準確，但由于需要昂貴的儀器設備、熟練的專業人員、煩瑣費時、周期長、費用高、不能現場操作、樣品篩檢量小等缺陷，其應用受到了限制。免疫學檢驗方法是以抗原抗體分子的特異性、可逆性反應為基礎的分析技術，包括熒光偏振免疫測定法(FPIA)、酶聯免疫吸附測定法(ELISA)、KinExA免疫測定法(KIA)、膠體金免疫層析試驗測定法(GICA)和微懸臂梁免疫傳感器(MIS)等，由于抗原抗體的結合具有高度的選擇性和敏感性，這一技術具有簡便、快速、敏感、特異、經濟、篩檢量大等優勢，代表著重金屬離子檢測的發展方向。目前，國內外重金屬汞離子污染免疫檢測技術研究非常活躍，其中公告號為CN103472231B的專利公開了一種汞離子間接競爭ELISA試劑盒，檢測靈敏度為10.31ng/mL，并且檢測時間較長。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種基于直接競爭酶聯免疫法檢測汞離子試劑盒及其應用，使所述試劑盒具有檢測時間短的優點，同時具有靈敏度高、特異性強的特點。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種基于直接競爭酶聯免疫法汞離子檢測試劑盒，包括：

(1)包被有羊抗鼠IgG二抗的檢測板，所述檢測板真空密封包裝；所述羊抗鼠IgG二抗的包被濃度為50～200μg/mL；