[發(fā)明專利]老年骨質(zhì)疏松性骨折的血清microRNA診斷標志物及其診斷試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710094675.0
• 申請日: 2017-02-22
• 公開（公告）號: CN106591487A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發(fā)明（設計）人: 騫愛榮;胡麗芳;馬劍華;李思宇;趙帆;陳志浩;李迪杰;陳楚;楊團民;印崇;蘇佩紅;馬小莉;張琰;仇伍霞;張茹;王牌;楊超飛
• 申請（專利權）人: 西北工業(yè)大學;西北工業(yè)大學深圳研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/113
• 代理公司: 西北工業(yè)大學專利中心61204
• 代理人: 王鮮凱

技術領域

本發(fā)明涉及一種老年骨質(zhì)疏松性骨折的血清microRNA診斷標志物，還涉及一種老年骨質(zhì)疏松性骨折的血清microRNA診斷試劑盒。

背景技術

老年性骨骼退行性改變常常引起骨質(zhì)疏松癥，嚴重的骨質(zhì)疏松常可導致骨折的發(fā)生，不僅增加了患者的經(jīng)濟負擔，并且降低了其生活質(zhì)量，甚至縮短了壽命。目前用于評估骨質(zhì)疏松性骨折風險的方法有骨密度檢測、FRAX、OSTA等。盡管骨密度、FRAX等方法目前還是骨質(zhì)疏松性骨折風險預測的主要方法，但其作為臨床檢測的局限性正在不斷顯現(xiàn)。骨密度檢測依賴各種X線設備，不僅有一定的輻照，而且難以有效地降低患者的檢測成本；FRAX及OSTA等在線工具雖然簡便快速，但精確度較低，更多地作為家庭自我評估的工具，難以作為臨床診斷的參考；血清生化標志物作為骨質(zhì)疏松性骨折標志物雖然有了一定的應用，但臨床缺乏完善的取樣、分析質(zhì)控體系，以及健全的參考數(shù)據(jù)庫，目前并未得到充分應用。隨著骨折風險評估研究的不斷深入，現(xiàn)有骨折風險評估方法的局限性正在不斷凸顯。

因此，尋找用于老年性質(zhì)疏松性骨折風險評估的標志物，不僅有助于完善現(xiàn)行的骨折風險評估方法，也對骨質(zhì)疏松早期診斷和預防骨折發(fā)生、提高老年人群的生活質(zhì)量有重要的意義。

循環(huán)microRNA是一類血液來源的～22nt內(nèi)源性非蛋白編碼RNA，可參與包括骨代謝在內(nèi)的多種生理和病理學過程。中國航天員科研訓練中心李英賢等人發(fā)明了一種用于骨質(zhì)疏松的診斷的血液檢測試劑盒，該發(fā)明通過對人血清中miR-214的研究發(fā)現(xiàn)，miR-214的水平與腰椎骨密度的T值呈明顯的正相關，miR-214的水平與骨吸收速率的敏感指標Ⅰ型膠原羧基端(CTX)的量呈明顯的負相關。但經(jīng)檢測，miR-214在成骨細胞高表達的小鼠血清中的含量與野生型小鼠相比，并未發(fā)生改變，即血清中miR-214水平與骨組織中miR-214水平無相關性。因此，仍不能直接根據(jù)人血清中的表達量的多少判定是否患有骨質(zhì)疏松癥。(李英賢，凌樹寬，李琦。一種用于骨質(zhì)疏松的診斷的血液檢測試劑盒[P].北京：CN104694639A，20150610)

綜上所述，基于現(xiàn)有的技術和方法，一方面缺少直接用于預警或診斷老年性骨質(zhì)疏松性骨折的診斷標志物，即缺少將骨組織來源的microRNA與血清中microRNA結合起來，篩選老年性骨質(zhì)疏松性骨折的診斷標志物。另一方面，在實際應用過程中，幾種診斷標志物的聯(lián)合使用會提高診斷的特異性與靈敏度。針對老年性骨質(zhì)疏松性骨折的診斷試劑盒的研發(fā)迫在眉睫。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有老年骨質(zhì)疏松性骨折的血清microRNA診斷試劑盒靈敏度差的不足，本發(fā)明提供一種老年骨質(zhì)疏松性骨折的血清microRNA診斷標志物及其診斷試劑盒。所述microRNA生物標志物為hsa-miR-497-5p、hsa-miR-1290、hsa-miR-4299、hsa-miR-181c-5p、hsa-miR-320a或hsa-miR-204-3p中的一種或者hsa-miR-181c-5p和hsa-miR-4299的組合，或者hsa-miR-497-5p和hsa-miR-1290的組合。所述標志物及其引物能夠用于診斷試劑盒，用于老年骨質(zhì)疏松性骨質(zhì)的診斷，該試劑盒靈敏度高。

本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種老年骨質(zhì)疏松性骨折的血清microRNA診斷標志物，其特點是：包括hsa-miR-497-5p、hsa-miR-1290、hsa-miR-4299、hsa-miR-181c-5p、hsa-miR-320a或hsa-miR-204-3p的任一種或者任幾種組合，所述標志物用于老年骨質(zhì)疏松性骨折診斷試劑盒中的診斷標志物。

一種老年骨質(zhì)疏松性骨折的血清microRNA診斷試劑盒，其特點是：包括用于擴增上述診斷標志物的引物，以及從血清中提取microRNA的試劑，其中所述用于擴增上述標志物的引物為反轉錄引物和cDNA的擴增引物，以及內(nèi)參基因5S的上游引物序列和下游引物序列。

上述的診斷試劑盒用于老年骨質(zhì)疏松性骨折的診斷。

其中，上述的試劑盒中hsa-miR-497-5p，hsa-miR-1290，hsa-miR-4299，hsa-miR-181c-5p，hsa-miR-320a，hsa-miR-204-3p的反轉錄引物序列分別為：

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