[發明專利]一種核糖體結合位點、重組表達質粒、轉化子及其應用

有效

• 申請號: 201710091153.5
• 申請日: 2017-02-20
• 公開（公告）號: CN108456669B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 陳玲;周豪宏;劉修才
• 申請（專利權）人: 上海凱賽生物技術股份有限公司;CIBT美國公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/67;C12P13/00
• 代理公司: 北京律智知識產權代理有限公司 11438
• 代理人: 王瑩;于寶慶

1.一種多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸的序列5’-3’是如下所示的序列之一：

a)、GAGAGGAGGA；

b)、AAGGGAAATT；

c)、TTAAAGAGGG。

2.一種重組表達質粒，包括重組表達質粒的目的基因及相應的核糖體結合位點，其特征在于，所述核糖體結合位點是權利要求1所述的多核苷酸。

3.如權利要求2所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述核糖體結合位點位于起始密碼子上游-15到-6位。

4.如權利要求2所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述重組表達質粒的骨架質粒是選自pUC、pBR322、pACYC質粒和它們的衍生質粒中的一種。

5.如權利要求2-4任一項所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述重組表達質粒的目的基因是編碼多肽的聚核苷酸；所述的多肽是酶或多肽類藥物。

6.如權利要求5所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述的酶是氧化還原酶、轉移酶、水解酶、裂合酶、異構酶和連接酶中的至少一種，所述多肽類藥物是激素、抗體和生長因子中的至少一種。

7.如權利要求6所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述裂合酶是脫羧酶。

8.如權利要求7所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述脫羧酶是氨基酸脫羧酶。

9.如權利要求7所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述脫羧酶是賴氨酸脫羧酶、酪氨酸脫羧酶、精氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶或谷氨酸脫羧酶。

10.如權利要求8所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述重組表達質粒的目的基因是編碼賴氨酸脫羧酶的聚核苷酸。

11.如權利要求10所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述編碼賴氨酸脫羧酶的聚核苷酸是來源于大腸桿菌(Escherichia?coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)、嗜堿芽孢桿菌(Bacillus?halodurans)、天藍色鏈霉菌(Streptomyces?coelicolor)、蜂房哈夫尼菌(Hafnia?alvei)、谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacterium?glutamicum)或奧克西托克雷白桿菌(Klebsiella?oxytoca)的賴氨酸脫羧酶基因。

12.如權利要求10所述的一種重組表達質粒，其特征在于，編碼賴氨酸脫羧酶的聚核苷酸是cadA基因、ldcC基因或haldc基因。

13.如權利要求10所述的一種重組表達質粒，其特征在于，編碼賴氨酸脫羧酶的聚核苷酸是cadA基因的片段、ldcC基因的片段或haldc基因的片段。

14.如權利要求12所述的一種重組表達質粒，其特征在于，所述cadA基因是來源于大腸桿菌(E.coli)的cadA基因。

15.一種轉化子，其特征在于，所述轉化子的基因組包含目的基因及相應的核糖體結合位點，所述核糖體結合位點是權利要求1所述的多核苷酸；

或者，所述轉化子的重組表達質粒是如權利要求2-14任一項所述的重組表達質粒。

16.如權利要求15所述的轉化子，其特征在于，所述核糖體結合位點位于起始密碼子上游-15到-6位；所述目的基因是編碼多肽的聚核苷酸；所述的多肽是酶或多肽類藥物。

17.如權利要求16所述的轉化子，其特征在于，所述的酶是氧化還原酶、轉移酶、水解酶、裂合酶、異構酶和連接酶中的至少一種，所述多肽類藥物是激素、抗體和生長因子中的至少一種。