[發明專利]一種基于聚多巴胺納米微球負載石墨烯量子點的電化學發光生物傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201710082787.4
• 申請日: 2017-02-16
• 公開（公告）號: CN106596678B
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 劉媛媛;趙彥華;諸宗偉;邢振遠;馬洪敏;張勇;王歡;魏琴
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;C08G73/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于聚多巴胺納米微球負載石墨烯量子點的電化學發光生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）PDANS@Ag的制備

80~120 mg鹽酸多巴胺加入到80~120 mL pH = 8.8的Tris-鹽酸緩沖溶液與30~70 mL異丙醇的混合液中，在室溫下避光反應24 h，將產品離心分離并用超純水洗滌五次，之后將產物分散到5 mL超純水中備用；取1 mL PDANS稀釋到5mL超純水中，在攪拌的條件下依次加入500~700 mg檸檬酸三鈉、20 mL 0.015~0.035 mol/L AgNO₃ 溶液，通入N₂除氧，避光條件下攪拌反應2.5 ~ 4.5 h；反應完成后，將產物離心分離，并用超純水洗滌三次，最后產物真空干燥；

（2）GQD的制備

稱取2 g 檸檬酸置于100 mL燒杯中，將燒杯置于200℃鼓風干燥箱中，5 min后檸檬酸開始熔解，隨后液體的顏色從無色變到淺黃色，30 min之后變成橘黃色，表明GQD的生成，之后用100 mL、8~12 mg/mL的NaOH溶液調節至中性，制得GQD溶液；

（3）巰基化GQD的制備

分別將13.4~17.4 mg巰基乙胺、85.8~105.8 mg EDC加入到20 mL GQD溶液中，室溫下振蕩反應24 h，將反應后的溶液透析兩天，制得巰基化GQD；

（4）PDANS@Ag/GQD的制備

將1~3 mL巰基化GQD溶液與1~3 mL濃度為2 mg/mL PDANS@Ag溶液混合，室溫下震蕩12 h，離心洗滌，得到PDANS@Ag/GQD；

（5）電化學發光生物傳感器的制備

①將直徑4 mm的玻碳電極依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化鋁拋光粉依次做拋光處理，用超純水沖洗干凈；

②滴涂6 μL、0.5~1.5 mg/mL的MWCNT/Pd納米立方體溶液至電極表面，室溫下晾干，用超純水沖洗電極表面，晾干；

③依次滴加10 μL 0.5~1.5 μmol/L凝血酶核酸適配體溶液，3 μL質量分數1%的牛血清白蛋白，封閉非特異性結合位點，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；

④滴加10 μL pDNA-PDANS@Ag/GQD溶液，在37℃下孵化1~3 h，置于4℃冰箱中晾干后用超純水沖洗電極表面；

⑤將電極浸入1×10^-14~1×10^-11 mol/L一系列不同濃度的凝血酶溶液中，在37℃下孵化40 min，制得了一種基于聚多巴胺納米微球負載石墨烯量子點的電化學發光生物傳感器。