[發明專利]菊芋中抗HSV?1、RSV、EV?71成分及制備

在審

• 申請號: 201710080999.9
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN107056959A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 周長征;劉飛;周祉延;牛鳳菊
• 申請（專利權）人: 周長征
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K36/28;A61K31/715;A61P31/22;A61P31/14
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技術領域

本發明涉及中藥活性成分生產提取工藝以及有效成分鑒定領域，涉及菊芋抗病毒有效部位提取的新思路新方法以及在制藥領域的新用途，具體涉及利用抗病毒追蹤的方式提取分離純化菊芋抗單純皰疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、腸道EV-71病毒的有效成分。

背景技術

最近幾年以來世界各地都受到了各種病毒的入侵，比如SARS病毒，甲型H1N1等，每次病毒的爆發都會引起人類的恐慌以及死亡。所以找到合適的抗病毒藥物迫在眉睫。

單純皰疹病毒能引起人類多種疾病，如齦口炎、角膜結膜炎、腦炎以及生殖系統感染和新生兒的感染。在感染宿主后，常在神經細胞中建立潛伏感染，激活后又會出現無癥狀的排毒，在人群中維持傳播鏈，周而復始的循環。

呼吸道合胞病毒是導致嬰幼兒急性下呼吸道感染最重要的病原體之一，可有高熱、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表現為細支氣管炎及肺炎。少數病兒可并發中耳炎、胸膜炎及心肌炎等。成人和年長兒童感染后，主要表現為上呼吸道感染，還可引起間質性肺炎及毛細支氣管炎等同時也可以引起老年人和免疫缺陷病人住院和肺炎死亡。

腸病毒在病毒學上屬于微小病毒科中的腸病毒群，EV-71是目前腸道病毒群中最晚發現的病毒，它的感染性極而強且致病率較高，尤其是在神經系統方面的并發癥。EV-71病毒是引起嬰幼兒手足口病的主要病原體之一，也可引起無菌性腦膜炎、腦干腦炎和脊髓灰質炎樣的麻痹等多種神經系統疾病。

菊芋俗稱洋姜、鬼子姜，屬菊科Compositac，是一種向日葵屬多年生宿根性草本植物，菊芋一般在秋季開花結果，此花形似菊，可食部分一般為塊莖，土壤里生長的塊莖富含多糖和淀粉等多種成分，菊芋具有抗氧化、抗癌、抗細菌和抗真菌等活性，可作為解熱、鎮痛、抗炎和抗痙攣的藥物治療骨折、腫脹、皮膚創傷和疼痛癥等。

菊芋對單純皰疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、腸道EV-71病毒具有一定的治療作用，實驗表明菊芋提取的有效成分對單純皰疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、腸道EV-71病毒有很好的治療作用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是明確了菊芋抗單純皰疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、腸道EV-71病毒的有效成分，并為該有效成分的分離提取提供了一種利用抗病毒追蹤的方式制備菊芋抗病毒有效成分的新方法。 該有效成分從菊科植物植物菊芋中提取分離得到可以用于單純皰疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、腸道EV-71病毒感染的治療。該方法可以較為簡便的對以上有效成分進行分離提取。

本發明的優點是，本發明首次分離出了菊芋中具有抗單純皰疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、腸道EV-71病毒的一種有效成分，并發明了一種抗病毒追蹤的方法對該有效成分進行了制備，此分離方法目的性強，簡單節省了大量的人力物力，優于傳統的系統分離。制備得到的有效成分對單純皰疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、腸道EV-71病毒具有較好的治療作用。

本發明菊芋抗單純皰疹Ⅰ型病毒、呼吸道合胞病毒、腸道EV-71病毒的有效成分為菊芋多糖，該有效成分的制備方法，包括如下步驟：

（1）取一定量的菊芋藥材用10倍的水加熱回流提取2次，第一次2小時，第二次1.5小時；

（2）合并兩次的提取液減壓濃縮，濃縮至每毫升藥液含有1克的藥材，然后加乙醇調節乙醇的濃度為,80%，靜置48小時。過濾得到沉淀和上清液；

（3）將上清液回收乙醇，將沉淀用水溶解，分別進行抗病毒實驗。實驗顯示沉淀的抗病毒效果較好；

（4）在攪拌下，向沉淀溶解液中慢慢滴入石灰乳，調節pH值至11.0，靜置片刻后，放入80 ℃水浴鍋中保溫1 h，抽濾除去不溶物，收集濾液；向濾液中緩慢滴入磷酸，并不斷攪拌，調節pH值至8.0，用離心機離心(4000 r/min，15 min)分離，收集離心液；

（5）向離心液中加入10倍量的石油醚，用分液漏斗萃取，靜置分層，上層為石油醚層，下層為水層，收集下層，重復3次，除去脂溶性雜質；

（6）采用Sevag法脫除提取液中的蛋白質，提取液：Sevag試劑=5:1（v/v），Sevag試劑為氯仿：正丁醇=5:1（v/v）。將氯仿和正丁醇混合均勻，在不斷攪拌下緩慢倒入裝有提取液的燒杯中，保鮮膜密封，用磁力攪拌器攪拌40 min，倒入分液漏斗中，靜止分層。液體分3層，上層為浸提液層，中間層為變性蛋白質層，下層為Sevag試劑層，收集上層溶液，并離心分離出少量變性蛋白質，按上述步驟重復操作5次，使提取液中的蛋白質脫除完全；