[發明專利]氨基官能團手性化合物拆分標記帶熒光衍生化試劑

有效

• 申請號: 201710080323.X
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN106770838B
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 閔俊哲;黃媛;婁喆
• 申請（專利權）人: 延邊大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88;G01N30/74
• 代理公司: 延邊科友專利商標代理有限公司 22104
• 代理人: 柳明哲

本發明涉及氨基官能團手性化合物拆分標記新型熒光衍生化試劑，具體指DBD?trans?2?methyl?L?proline(DBD?M?Pro)，DBD?(2?succinimidoxy)?trans?2?methyl?L?proline(DBD?S?M?Pro)試劑。這兩種試劑含有熒光基團苯并氧化呋咱(benzofurazan)及一個手性中心結構，可對氨基官能團手性化合物進行熒光標記，利用液相色譜?熒光檢測（LC?FL）技術，建立氨基官能團手性化合物拆分高靈敏、高選擇性的分析方法。因本試劑本身帶有熒光基團，可在熒光檢測器中能顯著提高檢測靈敏度，另外可在反相色譜中進行氨基官能團手性化合物的手性拆分，為氨基官能團手性代謝物的拆分研究及各種疾病手性生物標志物的篩選提供新型高靈敏度熒光手性衍生化試劑。

技術領域

本發明涉及生物分析領域的含氨基官能團手性代謝物分析，特別是指氨基官能團手性化合物的手性拆分用高靈敏度新型熒光衍生化試劑。

背景技術

手性（Chirality）是生物體系的一個基本特征，在藥學領域尤為突出。在許多情況下，兩個異構體藥物的生物活性如藥效和藥代動力學，有時會有顯著的差異。手性又是許多內源性代謝物重要的特征。為了準確地篩選真正有效的手性生物標志物，利用液相色譜-熒光檢測（LC-FL）技術，發展和建立高靈敏的手性代謝物分離分析方法，對于在藥物毒性和機理研究、疾病診斷和基因功能的闡明、藥物成分的安全性評價和體內手性代謝組學研究具有重要意義。

生物體內存在多種多樣的如氨基酸、乳酸等光學異構體低分子代謝物，人類一直認為只有一方的光學異構體具有生理活性。可隨著分析技術的進步和發展，1980年以后，發現了存在于生物體內的D-氨基酸如：D-Ser, D-Asp, D-Val, D-Leu, 2007年又在大白鼠的胰腺細胞中發現大量的D-Ala，并且對于血糖指數起到一定的控制作用。因此，D-氨基酸逐漸被認知為是內源性代謝物，作為新的生理活性物質、疾病診斷的生物標志物在代謝組學和診斷疾病領域倍受關注，但這些已知的D-氨基酸僅限于少數分子。對手性代謝生物標志物的篩選及針對光學異構體與疾病關聯性的研究還處在起步階段。

常用的手性分離測定技術有高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、毛細管電泳(HPCE)、超臨界液體色譜(SFC)等。其中HPLC是使用最為廣泛，有效的方法之一。HPLC分離分析對映體分為直接法和間接法。直接法具有操作簡便，分析過程中較少發生消旋化，添加劑選擇的范圍較寬，但系統平衡時間較長，添加劑消耗較大，通用性差。間接法是手性對映體在分離前，先與高光學純度衍生化試劑反應形成非對映體，再進行色譜分離測定。間接法雖然涉及樣品的衍生化反應使分析時間延長、對衍生化試劑有對映體的衍生化反應迅速且反應速率一致等較高的要求。但分離時可用價廉、柱效高的非手性柱，反應時可選擇衍生化試劑提高檢測靈敏度，因而在實際樣品中微量分析方面更受歡迎。至今的手性衍生化試劑針對熒光檢測為目標的試劑如：氨基類衍生化手性熒光試劑有NBD-PyNCS、DBD-PyNCS、DBD-L(D)-Pro,DBD-trans(cis)-4(3)-hydroxy-L(D)-proline等，任何試劑都與目標氨基官能團在緩和的條件下反應生成非對映體，可在廉價的ODS柱上能一定程度地拆分包括手性氨基酸的氨基官能團化合物。但這些熒光衍生化試劑對20種氨基酸中19種手性氨基酸尚未達到完全手性拆分的效果。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有熒光手性衍生化試劑對20種氨基酸中19種手性氨基酸尚未達到全部手性拆分的不足，提供一種氨基官能團手性化合物拆分標記帶熒光衍生化試劑，即本身帶有熒光基團及一個手性中心結構，靶向標記帶有氨基官能團手性化合物，并在廉價的反相色譜柱上可拆分19種手性氨基酸的新型高靈敏度熒光手性衍生化試劑。

為實現上述目的，本發明提供以下技術方案：