[發明專利]青岡樹組織培養的快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201710079760.X
• 申請日: 2017-02-15
• 公開（公告）號: CN106797888A
• 公開（公告）日: 2017-06-06
• 發明（設計）人: 唐春艷;陳素云
• 申請（專利權）人: 唐春艷;陳素云
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司45114
• 代理人: 蘭如康

技術領域

本發明屬于植物繁殖技術領域，涉及青岡樹組織培養的快速繁殖方法。

背景技術

青岡樹(Cyclobalanopsis glauca(Thunb.) Oerst. ),屬殼斗科櫟屬植物，為落葉或常綠喬木，五月開黃綠色花，花單性，雌雄同株，雄花柔荑花序，細長下垂。堅果卵形或橢圓形，生于杯狀殼斗中，十月成熟。葉子會隨天氣的變化而變化，所以還稱為“氣象樹”。為亞熱帶樹種，是我國分布最廣的樹種之一。朝鮮、日本、印度也有分布。中性喜光，幼齡稍耐側方庇蔭。喜生于微堿性或中性的石灰巖土壤上，在酸性土壤上也生長良好。深根性直根系，耐干燥，可生長于多石礫的山地。萌芽力強，可采用萌芽更新。木材質地堅硬耐腐，一般用來做鐵道枕木，也用來制造家具和器皿等。組織培養能通過無性繁殖，遺傳樹種的優良特性，能在短時間內快速繁殖獲得大量優質的組培苗，為優質種源推廣提供可能。青岡樹組織培養困難主要是因為外植體消毒困難，還有在初始芽誘導培養過程中，易褐化、初始芽發生率低、芽苗不伸長、活性差等瓶頸問題，嚴重限制了青岡樹優良無性系的推廣與應用。

發明內容

本發明的目的是針對青岡樹組織培養過程中芽增殖系數低，生長緩慢等問題,提供一種生長效果好、擴繁快的青岡樹嫩枝組培繁殖方法。

為了實現上述發明目的，本發明的技術方案如下：

青岡樹組織培養的快速繁殖方法，包括外植體選擇、外植體處理、初始芽誘導培養、增殖培養、壯芽培養和生根培養工序，采集半木質化、生長健壯的當年生青岡樹嫩枝作為外植體，對外植體進行修剪、滅菌消毒處理后接種于初始芽誘導培養基中獲取初始芽，再將初始芽接種于增殖培養基中經過3-4個周期增殖培養，形成叢生芽，將叢生芽接入壯芽培養基中培養，最后將高≥2cm的單芽插入生根培養基中誘導生根，具體操作步驟如下：

（1）外植體選擇：采集半木質化、生長健壯的當年生青岡樹嫩枝作為外植體；

（2）外植體處理：將外植體置于自來水下沖洗10-15 min，然后去除外植體葉片，再將外植體浸泡在體積濃度 0.1%的升汞溶液中，控制浸泡時間15-20 min，最后用純凈水洗凈藥物，將外植體裁成帶至少1個腋芽，1.5-3cm長的莖段，視莖段木質化程度分類置放容器內，備用；

（3）初始芽誘導培養：將步驟（2）得到的外植體接種于初始芽誘導培養基中培養，培養30-35 d，初始芽萌發、生長；

（4）增殖培養：將高≥1cm的初始芽接入增殖培養基中進行增殖培養，35-40 d轉接一次，循環往復，經3-4個周期的培養，形成叢生芽；

（5）壯芽培養：將步驟（4）得到的叢生芽進行切割，4-5顆芽/叢，插入壯芽培養基中，培養35-40 d，形成壯芽；

（6）生根培養：將步驟（5）得到的高≥2cm的單芽插入生根培養基中誘導生根；余下小芽叢再次接種于步驟（4）的增殖培養基中繼續增殖，然后再重復步驟（5），循環往復，獲得大量壯芽。

以上所述的初始芽誘導培養基的配方為：1/2改良WPM培養基+IBA 2.0-3.0 mg/L+6-BA 1.0-2.0 mg/L+ZT 1.5-2.0 mg/L+ VC 15 mg/L+葉酸10mg/L+VB₂ 15 mg/+瓊脂3.0 g/L+卡拉膠25 g/L。

以上所述的增殖培養基的配方為：改良WPM培養基+6-BA 6.0-8.0 mg/L+IBA 2.0-3.0 mg/L+ZT 0.5-1.0 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+瓊脂 3.6 g/L+卡拉膠 30 g/L。

以上所述的壯芽培養基的配方為：改良WPM培養基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+IBA 1.0-1.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB₂ 15 mg+L-半胱氨酸 20 mg/L+瓊脂 3.5 g/L+卡拉膠 25 g/L。

以上所述的生根培養基的配方為：1/2改良WPM培養基+6-BA 1.5-2.5 mg/L+IBA 1.0-1.5 mg/L+瓊脂 3.5 g/L+卡拉膠 30 g/L。