[發明專利]一種蛭弧菌微生態制劑的發酵制備方法

在審

• 申請號: 201710078028.0
• 申請日: 2017-02-14
• 公開（公告）號: CN106701638A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 郭立;敬科舉;林茂
• 申請（專利權）人: 廈門昶科生物工程有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 北京高沃律師事務所11569
• 代理人: 王加貴

1.一種蛭弧菌微生態制劑的發酵制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)使用大腸桿菌作為宿主，接入發酵培養基中；

2)接種蛭弧菌菌液至發酵罐中進行培養；

3)在發酵周期中流加大腸桿菌；

4)固液分離去除底部大腸桿菌，取上層澄清液即得蛭弧菌生態制劑；

所述步驟1)的發酵培養基為葡萄糖1～20g/L；胰蛋白胨1～20g/L；氯化鈉1～20g/L；氯化鈣0.1～2g/L，pH為6.5～8.0之間；

所述步驟3)中在發酵周期6～16小時內，流加大腸桿菌，所述大腸桿菌CFU為10¹⁰～10¹⁸/ml之間，流加時間為2～6小時之間，流加總發酵體積1～10％的量；

所述步驟3)中發酵周期為18～24小時。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)的發酵培養基的大腸桿菌CFU為10¹⁰～10¹⁸/ml之間。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)的蛭弧菌菌液PFU為10⁶～10⁸/ml，其來源為：雙層平板，下層為1.5％瓊脂平板，上層平板為葡萄糖1～20g/L；胰蛋白胨1～20g/L；氯化鈉1～20g/L；氯化鈣0.1～2g/L，瓊脂15～20g/L，pH為6.5～8.0之間，取100μlCFU為10⁵～10¹⁰/ml的宿主菌液與100μl PFU為10³～10⁵/ml的蛭弧菌混合加入上層平板進行篩選，挑取噬菌斑，使用大腸桿菌進行擴培，最后制備得PFU為10⁶～10⁸/ml的蛭弧菌菌液，接種體積為發酵液體積的1～10％之間。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中，發酵罐培養條件為：溫度為25～32℃，轉速為50～200rpm。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟4)中固液分離的方法為將所得的發酵液，在2～15℃溫度下靜置12～24h，使得大腸桿菌沉降于底部，取上層澄清部分，將澄清液使用超濾膜進行過濾，膜孔徑為0.5～1.5μm，即得蛭弧菌生態制劑。