[發明專利]一種抗BEX2單克隆抗體的制備和應用在審

申請號：	201710077782.2	申請日：	2017-02-14
公開（公告）號：	CN106831984A	公開（公告）日：	2017-06-13
發明（設計）人：	王芳;孫樹漢;朱怡卿;劉巖;馬金召;黃金鳳;袁繼行;楊富;薛賡	申請（專利權）人：	中國人民解放軍第二軍醫大學
主分類號：	C07K16/18	分類號：	C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574;C12R1/91
代理公司：	上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙)31268	代理人：	趙青
地址：	200433 ***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種 bex2 單克隆抗體制備應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體地說，是一種抗BEX2單克隆抗體，分泌該單克隆抗體的雜交瘤細胞株，以及該單克隆抗體在用于檢測BEX2中的應用。

背景技術

越來越多的研究表明，腫瘤細胞與早期胚胎細胞、多能干細胞具有相似性，多種在胚胎期高表達的信號分子、轉錄因子在腫瘤細胞中的表達也異常增加。其中，一些與胚胎發育和腫瘤相關的癌胚分子已經被廣泛地應用于腫瘤的早期診斷和預后分析。例如，癌胚抗原(Carcinoembryonic Antigen，CEA)是胃癌早期診斷的重要標志分子，甲胎蛋白(Alpha Fetoprotein，AFP)被用于肝癌的診斷和術后復發的評估。此外，以SALL4等癌胚基因為治療靶點的抗腫瘤藥物也在研發中。因此，癌胚基因對腫瘤的研究、診斷和治療具有重要意義。

BEX2(Brain-expressed X-linked 2，BEX2)是定位于X染色體、在腦中高表達，并與胚胎發育相關的基因。通過對人成肝和胎肝的表達譜芯片分析，研究人員發現，BEX2分子在肝臟胚胎期表達顯著高于成年期。同時，實時定量PCR檢測結果顯示BEX2在肝癌組織中的表達顯著高于癌旁組織。有報道稱，BEX2是重要的雷帕霉素靶蛋白(Target of Rapamycin，mTOP)通路的下游效應因子，參與乳腺癌細胞、神經膠質瘤細胞的增殖和轉移。上述研究表明，BEX2是一個癌胚分子，與腫瘤的發生發展密切相關。因此，BEX2是一個很有前景的腫瘤診斷和治療的靶分子。

發明內容

本發明的目的在于提供一種抗BEX2單克隆抗體、用于制備該單克隆抗體的蛋白、分泌該單克隆抗體的雜交瘤細胞株，以及該單克隆抗體的應用。

本發明單克隆抗體的獲得可采用本技術領域常規的方法，即通過在小鼠體內接種雜交瘤細胞并產生腹水抗體，取出腹水經純化得到。

本發明的第一方面，提供一種抗BEX2單克隆抗體，是由保藏編號為CCTCC No：C201709的雜交瘤細胞株分泌產生。所述的抗BEX2單克隆抗體是一種免疫球蛋白，可特異性識別BEX2蛋白。

本發明的第二方面，提供一種雜交瘤細胞株，命名為mBEX，保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏日期2017年1月6日，保藏編號CCTCC No：C201709。

本發明的第三方面，提供一種上述抗BEX2單克隆抗體的制備方法，包括以下步驟：

a)針對BEX2的編碼框氨基酸全序列(GENEBANK ID：568815575)，序列如SEQ ID NO：1所示，進行全基因合成，并將序列連接到表達載體中；鑒定陽性克隆，提取及表達菌轉化；大量誘導表達生產；Ni磁珠親和純化，經純化，得到蛋白抗原用于免疫；

b)將上述蛋白抗原作為免疫原免疫小鼠；

c)獲取免疫小鼠的脾細胞，與小鼠骨髓瘤細胞融合；

d)經多輪篩選出反應陽性的細胞克隆，作為生產抗BEX2蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株；

e)在免疫小鼠體內接種雜交瘤細胞獲得腹水抗體，將腹水進行純化，得到鼠來源的抗BEX2的單克隆抗體。

較優的，所述的步驟a中的表達載體為PET28a。