[發明專利]一種高效殺滅滴蟲等醫學原蟲的細菌培養上清液的制備方法和及其利用

在審

• 申請號: 201710075433.7
• 申請日: 2017-02-13
• 公開（公告）號: CN106801077A
• 公開（公告）日: 2017-06-06
• 發明（設計）人: 玄英花;鄧超;張馨心;程洋;延根
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12N1/20;A61K38/16;A61P33/02;C12R1/145
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技術領域

本發明屬于病原生物學領域，具體涉及一種高效殺滅滴蟲等醫學原蟲的細菌培養上清液的制備方法和及其利用方法。

背景技術

原蟲為單細胞真核動物.醫學原蟲是寄生在人體腔管、體液、組織或細胞內的致病及非致病性原蟲,約有40余種，醫學原蟲感染后容易引起阿米巴性痢疾、阿米巴性膿腫(以上主要為溶組織阿米巴)、陰道毛滴蟲感染等疾病。原蟲感染可發生在人體任何部位和組織，隨著經濟發展，大部分原蟲性疾病逐漸減少，但是近年來由于受性概念的轉變，陰道滴蟲病發病又有上升，美國每年婦女感染人數為300萬，全世界為1.8億，國外資料表明：滴蟲感染率與性接觸次數有關，成年處女感染率為零。我國上世紀50年代滴蟲的感染率已婚婦女為20％左右，上世紀70年代發病率明顯下降，以性機能旺盛期為易感年齡。

在局部原蟲感染治療中、特別是陰道滴蟲病治療中局部治療常常用滅滴靈(甲硝唑)或凝膠消毒劑，而滅滴靈有致癌作用，不適合孕婦等特殊人群使用，而且滅滴靈和消毒劑容易導致局部微生物菌群平衡失調，導致瘙癢等不適感。

發明內容

為克服上述技術缺陷，本發明提供了一種廣高效殺滅滴蟲等醫學原蟲的細菌培養上清液的制備方法和及其利用方法，具有毒性低、效果塊、配制方法簡便等特點。

本發明目的是通過采用以下技術方案實現的：

一種高效殺滅滴蟲等醫學原蟲的細菌培養上清液的制備方法和及其利用方法，其特征在于：所述培養基包括自配基礎培養基、促進艱難梭菌生長的添加劑、蒸餾水和促進艱難梭菌毒素分泌的添加劑。

所述促進艱難梭菌生長的添加劑為動物腸上皮水解產物；

所述添加液與蒸餾水的體積比為1:99～5:95；

所述促進艱難梭菌毒素分泌的添加劑為甲醇:

所述甲醇添加量為10～100mg/L:

優選的，所述自配基礎培養基的配方為可溶性淀粉10g/L，酵母浸出液5g/L，磷酸氫二鈉0.1g/L，磷酸二氫鉀1.5g/L，維生素B₂ 0.1g/L。

優選的，所述動物血液水解產物為鳥類或哺乳類動物腸上皮，處理溫度為190度以上200度以下,處理壓力2個大氣壓以上。

優選的，所述甲醇其純度在99％以上。

優選的，所述培養基的制備方法包括如下步驟：

(1)將動物腸上皮在190度以上200度以下溫度和2個大氣壓以上的條件進行水解，制備細菌生長促進劑；

(2)按自配基礎培養基配方稱取可溶性淀粉10g/L，酵母浸出液5g/L，磷酸氫二鈉0.1g/L，磷酸二氫鉀1.5g/L，維生素B₂ 0.1g/L，加入所述細菌生長促進劑和所述蒸餾水，混勻，121℃高壓滅菌25min；所述細菌生長促進劑與蒸餾水的體積比為1:99～5:95；

(3)滅菌后放置室溫冷卻至60℃后添加甲醇50mg。

優選的，所述培養細菌為艱難梭菌；

優選的，所述艱難梭菌可分泌艱難梭菌毒素A和B以及二元毒素B；

優選的，所述艱難梭菌為ATCCBAA-1805菌株；

優選的，所述艱難梭菌培養上清液，可以以原始狀態(液態)使用，使用濃度為1～10％左右的水溶液；

優選的，所述艱難梭菌培養上清液，可以經過濃縮干燥使用，使用時濃度為10～1000mg/L。

優選的，所述艱難梭菌培養上清液，可以經過蛋白鹽析、沉淀等精化后使用，使用時濃度為1～100mg/L。

優選的，所述的上清液處理物可添加到外用藥物使用

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

(1)本發明培養基利用了細菌生長促進劑，可促進艱難梭菌的生長和毒素的分泌，提高培養上清中的毒素含量，達到能夠殺滅原蟲的濃度。

(2)本發明方法所獲得的培養上清液可以低毒性、短時間、高效的殺滅局部的原蟲。

具體實施方式

為使本發明更加容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按照常規實驗方法進行。

實施例1：本發明培養基和傳統培養基對艱難梭菌生長對比測試

1、配制傳統培養基

秤取腦心浸液肉湯(BHI)培養基(購自青島海博生物技術有限公司)38.5g，現配1L液體培養基，分注試管后121度、1.2個大氣壓滅菌15分鐘后，接種艱難梭菌ATCC BAA-1805設為對照組。