[發(fā)明專利]子宮內(nèi)膜抗原的制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710068288.X | 申請(qǐng)日： | 2017-02-08 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN106841592B | 公開（公告）日： | 2019-03-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊致亭;王好玉;馬金環(huán);胡學(xué)亭;于剛;王婷 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 濰坊市康華生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K1/14 | 分類號(hào)： | C07K1/14;G01N33/535 |
| 代理公司： | 濰坊正信致遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37255 | 代理人： | 王偉霞 |
| 地址： | 261023 山東*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 子宮 內(nèi)膜 抗原 制備 方法 | ||
1.子宮內(nèi)膜抗原的制備方法，其特征在于所述制備方法包括以下步驟：
(1)膠原酶母液的配置：取膠原酶，然后用0.1M、pH為7.4的PBS緩沖液溶解，得到終濃度為10-20mg/ml的膠原酶母液；
(2)獲取子宮內(nèi)膜腺體：將步驟(1)中的膠原酶母液稀釋，得到濃度1-2mg/ml的膠原酶稀釋液,然后取沖洗干凈的牛子宮內(nèi)膜，按照料液比30-50:1的比例加入膠原酶稀釋液，在37℃水浴或者恒溫?fù)u床上溫育消化4-48小時(shí)，在篩網(wǎng)上用沖洗液沖洗得到子宮內(nèi)膜腺體；
(3)勻漿處理：取步驟(2)中的子宮內(nèi)膜腺體，加入到-18～-22℃預(yù)冷的丙酮溶液中，勻漿處理60-120s，然后用濾紙過(guò)濾或布氏漏斗抽濾，去除濾液，收集過(guò)濾物；
(4)子宮內(nèi)膜抗原的提取純化：取步驟(3)中的過(guò)濾物，用緩沖溶液溶解，攪拌過(guò)夜，離心處理得到的上清液用0.45um的濾膜過(guò)濾，然后再用ProG親和層析柱分離純化，收集蛋白峰出峰位置的流出液，濃縮得到子宮內(nèi)膜抗原；
其中步驟(4)中的緩沖溶液為0.01M-0.05MTris、0.01M-0.05MEDTA、0.1M-0.15M氯化鈉、1mM-1.5mMPMSF、1mM-1.5mMDTT和1mM-1.5mM亞硫酸氫鈉的混合液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的子宮內(nèi)膜抗原的制備方法，其特征在于:步驟(2)中的膠原酶稀釋液濃度為1mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的子宮內(nèi)膜抗原的制備方法，其特征在于:步驟(2)中的篩網(wǎng)為孔徑250um、60um、40um篩網(wǎng)中任意兩種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的子宮內(nèi)膜抗原的制備方法，其特征在于:步驟(2)中的沖洗液為0.01MPBS或等滲生理鹽水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的子宮內(nèi)膜抗原的制備方法，其特征在于:步驟(3)中丙酮溶液的體積濃度為30％-50％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的子宮內(nèi)膜抗原的制備方法，其特征在于:步驟(4)中的緩沖溶液用之前在4℃冰箱中預(yù)冷10-30min。
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