[發明專利]一種有效凈化水質的益生菌制備方法

在審

• 申請號: 201710067235.6
• 申請日: 2017-02-06
• 公開（公告）號: CN106754559A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 王文琪;徐申波;王鑫;任貽超;楊寧
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C02F3/34;C12R1/085;C02F101/16
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發明涉及的是水產養殖技術領域，具體的說是一種有效凈化水質的益生菌制備方法。

背景技術

隨著水產養殖業的迅猛發展，集約式養殖規模日益擴大，由于該模式養殖密度高，投喂量大，再加上投喂方式不合理，導致大量的飼料殘留，使水體富營養化，藻類過度繁殖而導致養殖水體嚴重缺氧，同時養殖動物糞便及殘體沉積水中，在厭氧環境下被分解產生硫化氫、氨氮、亞硝酸鹽等有毒中間物質，導致水質惡化，有害微生物滋生，嚴重影響我國水產養殖業的長遠發展。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的缺陷和不足，提供了一種有效凈化水質的益生菌制備方法，芽孢桿菌能迅速降解養殖池中的有機物，有效改良水質，而且芽孢桿菌還具有無毒副作用、無殘留、不產生抗藥性、穩定性好等優勢。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種有效凈化水質的益生菌制備方法，其方法是：從對蝦養殖池中采集水樣、底泥、糞便樣品以及對蝦腸道中分離篩選芽胞桿菌菌群，經過80℃水浴、氨氮培養基篩選得到菌株，再用形態學特征、生理生化特性結果和16S rDNA進行鑒定，通過安全性試驗對其進行初步研究，篩選出具有優良特性的土著海水芽孢桿菌。

本發明的有益效果為：篩選出的芽孢桿菌可以降低水中氨氮和亞硝酸鹽的含量，進而對對蝦體內免疫酶活性產生影響，也能夠起到促進對蝦機體免疫能力的作用，其在微生態制劑應用中具有廣闊的應用前景。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1是本發明篩選的JNSY1菌株對養殖水體氨氮含量的影響；

圖2是本發明篩選的JNSY1菌株對養殖水體亞硝酸鹽含量的影響；

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及具體實施方式，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施方式僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

一、菌株分離和篩選：

(1)、取5g樣品，加入盛有45ml無菌生理鹽水的三角瓶中。懸浮液于80℃下保持20min，殺死不能形成芽孢的其他菌體。

(2)、取5ml處理過的懸浮液接入到裝有45ml富集培養基的三角瓶內，37℃富集培養24h～48h。

(3)、取1ml富集培養后的菌液，用無菌水稀釋梯度至10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7，稀釋度為10^-6、10^-7的菌懸液各取100μL涂布在分離培養基上，37℃培養24h。

(4)、挑選生長良好的菌落劃線分離，重復2-3次后挑選優勢菌落4℃斜面保存待用。

(5)、得到的各芽孢桿菌菌株，用1％的無菌生理鹽水稀釋后，將稀釋的菌液用涂布棒平板涂布到氨氮降解菌篩選培養基上，30℃，24h培養，觀察菌種長勢，挑取菌落大、生長速度快的優勢菌株保種備用。

(6)、經過富集、分離和純化，得到8株細菌，分別編號為HDSY1、YKSY1、JNSY1、YKCD1、HDCD1、JDCD1、HDFB1、JNFB1和YKFB1。經活化后的8株菌接種到篩選培養基上，30℃培養24h后，觀察發現菌株JNSY1菌落大、生長速度快。因此選擇JNSY1為試驗菌株。

二、菌株鑒定：

1、挑取單菌落純化，在營養瓊脂培養基上染色鏡檢，JNSY1菌株單菌落為白蠟狀表面光滑的乳白色圓形突起，直徑約2mm；革蘭染色為陽性，呈長桿狀。

2、取1ml富集菌落培養液于離心管中，12000r/min離心5min。去掉上清液然后加入100ul無菌水混合，100℃水浴加熱10min，冰浴2min，12000r/min離心5min，上清液即為該菌DNA模板。