[發明專利]一種HIV抗原抗體檢測卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201710067098.6
• 申請日: 2017-02-07
• 公開（公告）號: CN106771195A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 楊致亭;隋振國;陳利軍;魏紅;王明儒;楊明霞
• 申請（專利權）人: 濰坊市康華生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 濰坊正信致遠知識產權代理有限公司37255
• 代理人: 王偉霞

技術領域

本發明涉及生物監測技術領域，具體涉及一種HIV抗原抗體檢測卡及其制備方法。

背景技術

艾滋病，全名為“獲得性免疫缺陷綜合癥”(Acquired Immune Deficiency Syndrome)，英文縮寫AIDS，是人體感染了人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)所導致的傳染病。HIV本身并不會引發任何疾病，而是當免疫系統被HIV破壞后，人體由于失去抵抗能力而感染其他的疾病導致死亡。

HIV的感染可通過檢測HIV特異性抗體、抗原、核酸或病毒分離培養加以確立，常規使用的標準診斷項目是血清學抗體檢測。從1985年第一代HIV抗體檢測試劑問世到現在，HIV血清學檢測試劑已經發展到了第四代。1998年，國際上出現第四代HIV檢測試劑，它可同時檢測抗體和p24抗原，又稱為HIV抗原/抗體診斷試劑。

生物素-親和素系統(Biotin-Avidin-System，BAS)是一種具有高親和力、靈敏度高、特異性強和穩定性好等優點的信號放大標記技術，BAS具有高靈敏度、高特異性、高穩定性和適用性等特點。生物素易與蛋白質和核酸類等生物大分子結合，形成的生物素衍生物，不僅保持了大分子物質的原有生物活性，具多價性。此外，每個親和素分子有四個生物素結合部位，可同時以多價形式結合生物素化的大分子衍生物和標記物。因此，BAS具有多級放大作用，使其在應用時可極大地提高檢測方法的靈敏度。

目前，現有技術已實現HIV抗原抗體的檢測，但樣本用量較大，大約需要60至100μL，靈敏度有待于提高。因此本發明人利用生物素-親和素系統的優點，開發了一種HIV抗原抗體的檢測卡。

發明內容

本發明的目的在于是：針對現有技術存在的不足，提供一種靈敏度高，樣本用量少的HIV抗原抗體檢測卡。

為了實現上述發明的目的，本發明的技術方案是：

一種HIV抗原抗體檢測卡，所述檢測卡包括卡蓋、卡體和試紙條，所述卡蓋上依次設有稀釋液加樣孔、樣本加樣孔、觀測孔和安裝標示孔，所述卡體的內部設有放置試紙條的凹槽；所述試紙條依次設有樣品墊層、膠體金層、硝酸纖維素膜和吸水層，所述樣品墊層固相有生物素標記的p24抗體，所述膠體金層固相有重組HIV-1/HIV-2抗原和鼠抗p24單克隆抗體的膠體金標記物；所述硝酸纖維素膜依次設有包被重組HIV-1/HIV-2抗原的檢測線、包被親和素的檢測線和包被羊抗鼠IgG抗體的質控線。

作為一種優選的技術方案，所述卡蓋和卡體為卡扣連接。

作為一種改進的技術方案，所述試紙條的樣品墊層與所述卡蓋的稀釋液加樣孔和樣本加樣孔相對應；所述試紙條的膠體金層和硝酸纖維素膜與所述卡蓋的觀測孔相對應。

本發明的另一個目的是提供一種HIV抗原抗體檢測卡的制備方法。

為了實現上述發明的目的，本發明的技術方案是：

一種HIV抗原抗體檢測卡的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

(1)膠體金的制備

0.8～1.5wt％氯金酸水溶液100mL，加熱至沸騰，加入0.8～1.2wt％檸檬酸三鈉1.0mL，迅速混勻，繼續煮沸10分鐘，膠體金溶液變酒紅色，冷卻備用；

(2)膠體金的標記

2.1膠體金標記重組HIV-1/HIV-2抗原：取步驟(1)中制備的膠體金溶液50mL，用0.1mol/L K₂CO₃調pH6.0～6.5，隨后加入2～4mL濃度為0.8～1.2mg/mL的重組HIV-1/HIV-2抗原，攪拌2～5分鐘，加入4～6mL質量分數為0.8～1.2％的PEG20000水溶液，于8000～12000r/min離心25～35分鐘，吸去上清液，將沉淀懸浮于0.1～0.3mg/mL PEG20000的水溶液中，以0.5mg/mL疊氮鈉防腐，置3～5℃保存；

2.2膠體金標記鼠抗p24單克隆抗體：取步驟(1)中制備的剩余膠體金溶液50mL，用0.1mol/L K₂CO₃調至pH8.9～9.2，隨后加入4～6mL濃度為0.8～1.2mg/mL的鼠抗p24單克隆抗體，攪拌2～5分鐘，加入4～6mL質量分數為0.8～1.2％的PEG20000水溶液，于15000r/min離心35～45分鐘，吸去上清液，將沉淀懸浮于濃度為0.4～0.6mg/mL PEG20000的水溶液中，以0.5mg/mL疊氮鈉防腐，置3～5℃保存；

(3)生物素標記p24抗體