[發明專利]一種通過控制LsFT基因來培育耐抽薹型生菜的方法

在審

• 申請號: 201710059850.2
• 申請日: 2017-01-24
• 公開（公告）號: CN106754970A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 王倩;陳子敬;韓瑩琰
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過控制LsFT基因來調節生菜抽薹開花起始時間的方法，其特征在于，所述LsFT基因具有SEQ ID NO.27所示的編碼序列。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述控制LsFT基因為抑制LsFT基因的功能，并且所述調節生菜抽薹開花起始時間為延遲生菜抽薹開花起始時間。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述抑制LsFT基因的功能通過LsFT基因的轉錄抑制或者轉錄后抑制來實現；優選的是，所述抑制LsFT基因的功能通過基因敲除或者基因沉默的方式實現；更優選的是，所述抑制LsFT基因的功能通過LsFT-RNAi技術來實現。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，LsFT-RNAi技術使用的LsFT-RNAi載體選用5'末端AscⅠ位點、3'末端SwaⅠ位點、5'末端BamHⅠ位點和3'末端SpeⅠ位點構建得到。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述LsFT-RNAi載體借助農桿菌通過子葉轉染法浸染生菜子葉來導入。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法采用包括種子培養基、共培養培養基、分化培養基、生芽培養基、和生根培養基的遺傳轉化培養基體系進行，其中：

所述種子培養基包含4.44g/L的MS粉，30g/L的蔗糖和6.8g/L的瓊脂；

所述共培養培養基包含4.44g/L的MS粉、30g/L的蔗糖，6.8g/L的瓊脂，0.1mg/L的6-BA和0.1mg/L的NAA；

所述分化培養基包含4.44g/L的MS粉，30g/L的蔗糖，6.8g/L的瓊脂，0.1至0.2mg/L的6-BA，0.1mg/L的NAA和300mg/L的頭孢霉素；

所述生芽培養基包含2.22g/LMS粉，15g/L的蔗糖，2.22g/L的植物凝膠和300mg/L的頭孢霉素；和/或

所述生根培養基包含2.22g/L的MS粉，15g/L的蔗糖，6.8g/L的瓊脂和300mg/L的頭孢霉素。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述種子培養基、共培養培養基、分化培養基、生芽培養基和生根培養基pH各自獨立地為6.5至6.8。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)將生菜種子在30％次氯酸鈉溶液里消毒5分鐘，然后播種在所述種子培養基上；

(2)在播種后第6天時，切下幼苗子葉劃傷并放入含有農桿菌的1/2MS液體培養基里侵染13分鐘，然后將子葉放到所述共培養培養基中在28℃黑暗培養2天，所述農桿菌導入有LsFT-RNAi載體并且所述1/2MS液體培養基的OD_600nm值為0.2–0.3；

(3)將在共培養培養基培養后的的子葉移到分化培養基培養1至2周內從而在愈傷組織上長出芽體；

(4)將芽體切下并移植到生芽培養基中培養2周；

(5)將在生芽培養基中培養后的芽體轉移到生根培養基中培養直至得到根長達到5至8cm的幼苗；

(6)將幼苗轉入帶有培養土的種植容器中馴化培養2周的時間，然后移栽至土壤中直至收獲。

9.LsFT基因在提前植物生殖生長發生時間中的應用，所述LsFT基因具有SEQ ID NO.27所示的編碼序列，并且所述提前植物生殖生長發生時間通過增強LsFT基因的功能來實現。

10.LsFT基因在延遲植物生殖生長發生時間中的應用，所述LsFT基因具有SEQ ID NO.27所示的編碼序列，并且所述延遲植物生殖生長發生時間通過抑制LsFT基因的功能來實現。