[發(fā)明專利]一種利用非靶標(biāo)代謝組學(xué)技術(shù)鑒別洋槐蜜產(chǎn)地的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710058774.3
• 申請(qǐng)日: 2017-01-23
• 公開（公告）號(hào): CN106645538B
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周金慧;李熠;問亞琴;張文文;陳蘭珍;張金振;金玥;趙文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蜂蜜產(chǎn)地鑒別技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種篩選用于鑒別蜂蜜產(chǎn)地的特征標(biāo)志物的方法，還涉及利用該特征標(biāo)志物進(jìn)行蜂蜜產(chǎn)地鑒別的方法。尤其涉及一種篩選用于鑒別洋槐蜜產(chǎn)地的特征標(biāo)志物的方法，以及洋槐蜜產(chǎn)地的鑒別方法。

背景技術(shù)

我國(guó)是世界養(yǎng)蜂大國(guó)，蜂蜜年產(chǎn)量超過45萬(wàn)噸，是蜂蜜生產(chǎn)、消費(fèi)和出口大國(guó)。研究表明，蜂蜜含有近百余種內(nèi)源性成分，葡萄糖和果糖占總成分含量的70％以上，其次是水分、蔗糖、礦物質(zhì)、維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸等。近幾年，消費(fèi)者對(duì)蜂蜜的興趣與日俱增，這主要是因?yàn)榉涿塾幸娼】担热缈咕⒖寡住⒖雇蛔儭⒖鼓[瘤、抗氧化活性。蜂蜜成分與其植物源和地理源密切相關(guān)，因?yàn)榉涿鄢煞秩菀资艿缴a(chǎn)地區(qū)土壤和氣候特性的影響。相比于雜花蜜，單一植物源和地理源的蜂蜜能夠提供一種獨(dú)特的口味和質(zhì)量屬性而具有更高的價(jià)值。在銷售環(huán)節(jié)中，消費(fèi)者也非常關(guān)注具有特定產(chǎn)地真實(shí)標(biāo)簽的蜂蜜，所以蜂蜜的質(zhì)量和價(jià)格取決于其植物源和地理源。因此，對(duì)不同產(chǎn)地的蜂蜜進(jìn)行鑒別對(duì)消費(fèi)者具有重要意義。

已有的鑒別不同植物源和產(chǎn)地的蜂蜜技術(shù)包括孢粉學(xué)、指紋識(shí)別、化學(xué)統(tǒng)計(jì)分析和標(biāo)記物識(shí)別。孢粉學(xué)主要通過顯微鏡觀察花粉的大小、形狀和顏色，但是這種方法非常難掌握并且容易得出不同的花粉具有相同的花粉特征這種錯(cuò)誤的結(jié)果，這主要是由于該方法極易受檢驗(yàn)人員主觀因素影響而導(dǎo)致分析偏差。基于能夠反映不同化學(xué)成分特征輪廓的色譜和指紋識(shí)別技術(shù)已經(jīng)被認(rèn)為是一種可靠的蜂蜜樣品質(zhì)量控制技術(shù)。但是獲得可靠的指紋圖譜比較困難，因?yàn)樵诓煌膶?shí)驗(yàn)室和不同批次樣品之間，實(shí)驗(yàn)條件難以完全重現(xiàn)，大量低含量化合物的基線、響應(yīng)值和保留時(shí)間就會(huì)導(dǎo)致偏差。并且盡管指紋識(shí)別技術(shù)全面展示了樣品信息，并沒有對(duì)從數(shù)據(jù)中獲得的信息進(jìn)行深入挖掘。化學(xué)統(tǒng)計(jì)計(jì)量學(xué)在分析龐大的數(shù)據(jù)特別是復(fù)雜數(shù)據(jù)的大樣本集，分析植物源和地理源，并建立可靠模型方面體現(xiàn)出巨大優(yōu)勢(shì)。但是，這種方法需要大量的樣本建立一個(gè)可靠的模型，而確定樣品真實(shí)性又依賴于所開發(fā)的模型，實(shí)際應(yīng)用十分困難。

特征標(biāo)記物可以簡(jiǎn)單方便地對(duì)蜂蜜進(jìn)行溯源分類。現(xiàn)有的蜂蜜鑒別方法均基于在初步假設(shè)某一類化合物的基礎(chǔ)上，將某一個(gè)目標(biāo)代謝物在作為潛在的標(biāo)志物。如基于多種儀器技術(shù)將酮類化合物、酚類化合物；碳水化合物、礦物質(zhì)和微量元素、揮發(fā)性化合物、有機(jī)酸、氨基酸等內(nèi)源性化合物，以及脫落酸、橙皮素、鄰氨基苯甲酸甲酯和3-氨基苯乙酮等特殊化合物作為標(biāo)記物，來(lái)確定蜂蜜的植物源和地理源。但是，蜂蜜是一種由蜜蜂生產(chǎn)的天然的并且組分極其復(fù)雜的產(chǎn)品，根據(jù)植物源和地理源不同而具有多種大量的內(nèi)源性化合物。因此，根據(jù)事先主觀假設(shè)的一類化合物尋找出某一種可靠的標(biāo)志物鑒別其植物源和地理源是十分有限也不科學(xué)的。

然而采用非靶向比較代謝組學(xué)探索特定的標(biāo)記物可以解決這個(gè)問題。非靶向代謝組學(xué)通過分析數(shù)據(jù)集中的全部信息盡可能多的獲得一個(gè)復(fù)雜樣品中的代謝產(chǎn)物。利用與庫(kù)匹配的多元統(tǒng)計(jì)技術(shù)，非靶向代謝組學(xué)已經(jīng)廣泛應(yīng)用通過來(lái)自分析不同條件下的不同樣品的大量數(shù)據(jù)來(lái)確定標(biāo)志物方面。核磁共振技術(shù)和高分辨質(zhì)譜技術(shù)在非靶向代謝領(lǐng)域作為主要的技術(shù)手段，通過評(píng)估代謝水平的變化來(lái)反映基質(zhì)本身的變化和環(huán)境影響。核磁共振的主要優(yōu)勢(shì)在于無(wú)損樣品既可獲得大量數(shù)據(jù)。最近，液相色譜或氣相色譜于質(zhì)譜聯(lián)用在非靶向分析確定代謝物中得到廣泛應(yīng)用，因?yàn)樵摷夹g(shù)能夠在前端的分離系統(tǒng)中將各種化學(xué)組分在復(fù)雜的混合物中分離出來(lái)，并在后端的質(zhì)譜系統(tǒng)中獲得準(zhǔn)確的質(zhì)量信息。

發(fā)明內(nèi)容

以往蜜蜂產(chǎn)地的鑒定方法都集中于某一類物質(zhì)(如黃酮類、酚酸類、有機(jī)酸類等)的分析，即通過購(gòu)買標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，然后對(duì)樣品中該物質(zhì)進(jìn)行定量分析，依據(jù)該物質(zhì)在不同產(chǎn)地蜂蜜樣品中的含量是否存在差異確定該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)能否作為特征標(biāo)志物，這被稱為靶標(biāo)技術(shù)。靶標(biāo)技術(shù)尋找特征標(biāo)志物的范圍十分的有限，不能探尋出真正的特征物質(zhì)。本發(fā)明提供的蜂蜜產(chǎn)地鑒別方法是基于非靶標(biāo)技術(shù)，即從蜂蜜樣品的全譜圖中搜尋特征標(biāo)志物，特征標(biāo)志物的確定更加客觀精準(zhǔn)，篩選得到的特征標(biāo)志物更具有說(shuō)服力。同樣地，利用該特征標(biāo)志物對(duì)不同產(chǎn)地的蜂蜜進(jìn)行鑒別，鑒別結(jié)果也更加精準(zhǔn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案之一是：一種篩選用于鑒別蜂蜜產(chǎn)地的特征標(biāo)志物的方法，包括如下步驟：

(1)取來(lái)自兩個(gè)已知不同產(chǎn)地的相同蜜源蜂蜜樣品，相同產(chǎn)地的若干蜂蜜樣品為一組；以純水為溶劑，分別對(duì)每組中的蜂蜜樣品進(jìn)行溶解，得多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品，備用；