[發(fā)明專利]一株用于防治對蝦副溶血弧菌病的噬菌體及其擴(kuò)培方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710049470.0
• 申請日: 2017-01-23
• 公開（公告）號: CN106995803B
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林茂;付漢清
• 申請（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K35/76;A61P31/04;C02F3/34;C02F103/20
• 代理公司: 11350 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明公開了一株用于防治對蝦副溶血弧菌病的噬菌體及其擴(kuò)培方法，本發(fā)明利用南美白對蝦感染的副溶血弧菌在海水中成功篩選出一株強(qiáng)裂解性噬菌體，該噬菌體效價高達(dá)10¹⁰?10¹²pfu/mL，發(fā)酵周期為8?12h，治療效果明顯，對于治療副溶血弧菌引起的病害和開發(fā)噬菌體微生態(tài)制劑具有重大意義。該噬菌體的保藏單位代碼為CCTCC?中國典型培養(yǎng)物保藏中心,地址為：武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)校內(nèi)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期是2016年12月9日，保藏編號為CCTCC NO：M 2016740，保藏檢測結(jié)果為存活，名稱為副溶血弧菌噬菌體VP11，分類命名為Vibrio parahaemolyticus bacteriophage VP11。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一株用于防治對蝦副溶血弧菌病的噬菌體及其擴(kuò)培方法。

背景技術(shù)

目前控制、消除致病菌的主要手段仍是各種物理或化學(xué)的方法，包括各種抗生素的使用。物理或化學(xué)的方法都存在著明顯的弊端。首先，物理的方法對各種致病菌的消除作用只能應(yīng)用于相關(guān)領(lǐng)域的某一環(huán)節(jié)，不能實(shí)現(xiàn)整個領(lǐng)域所有環(huán)節(jié)的應(yīng)用，其次，化學(xué)方法中的酸堿處理雖可以取得一定防治效果，但在有害菌形成生物膜后，這些方法的效果就極不理想；最后，抗生素雖然開始使用效果顯著，但是長期使用，不僅會增強(qiáng)病原菌的抗藥性，而且抑制有益菌群，最終不能有效地控制、消除致病菌。

近年來，微生物生態(tài)制劑的研究開發(fā)受到各方關(guān)注，特別是噬菌體的研究受到人們的青睞。噬菌體自1896年被發(fā)現(xiàn)以來，因其高效裂解其宿主，且對人和動物無害，而備受關(guān)注。噬菌體是一種細(xì)菌病毒，它能夠?qū)λ拗骷?xì)菌產(chǎn)生特異性的裂解作用，并在細(xì)菌培養(yǎng)板上形成空斑，因而將其命名為噬菌體。噬菌體分為溫和噬菌體和烈性噬菌體，其中烈性噬菌體對宿主菌具有很強(qiáng)的裂解效率，其復(fù)制效率和繁殖能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于宿主菌；烈性噬菌體在宿主菌內(nèi)能穩(wěn)定增殖后，一個噬菌體顆粒能夠殺死數(shù)億個宿主菌。噬菌體效價(滴度)是單位體積內(nèi)(mL)內(nèi)有的噬菌體個數(shù)。由于噬菌體對宿主菌的高效裂解能力，用于治療細(xì)菌感染，特別是治療耐藥細(xì)菌感染的噬菌體制劑的研究已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一，受到越來越多的生物技術(shù)公司和研究機(jī)構(gòu)的重視。

專利號為CN200910038392.X名稱為一種分離的副溶血弧菌噬菌體及其在殺菌和防菌中的應(yīng)用的國家發(fā)明專利公開了一種分離的副溶血弧菌噬菌體(Vibrioparahaemolyticus)及其在殺菌和防菌中的應(yīng)用。分離出的噬菌體單體命名為BPH-VP-1，對副溶血弧菌具有廣譜的殺菌能力。

專利申請?zhí)枮?01510872234.X名稱為一種副溶血弧菌噬菌體及其制備方法和應(yīng)用涉及一種副溶血弧菌噬菌體及其作為生物殺菌劑在食品及水產(chǎn)品養(yǎng)殖環(huán)境中的殺菌應(yīng)用。分離的副溶血弧菌噬菌體，保藏號CCTCC M 2015577，對副溶血弧菌具有高效的裂解活性，其分離培養(yǎng)物及復(fù)配制劑能夠作為食品添加劑或環(huán)境消毒劑防控食品中副溶血弧菌的污染。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一株用于防治對蝦副溶血弧菌病的噬菌體及其擴(kuò)培方法，具有噬菌體裂解性強(qiáng)的特點(diǎn)，該噬菌體具有殺菌速度快、產(chǎn)量高的特點(diǎn)，同時在發(fā)酵結(jié)束時，對發(fā)酵液進(jìn)行固液分離，避免了副溶血弧菌對環(huán)境的危害。該噬菌體的保藏單位代碼為CCTCC-中國典型培養(yǎng)物保藏中心,中國典型培養(yǎng)物保藏中心地址為：武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)校內(nèi)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期是2016年12月9日，保藏編號為CCTCC NO：M 2016740，保藏檢測結(jié)果為存活，名稱為副溶血弧菌噬菌體VP11，分類命名為Vibrio parahaemolyticus bacteriophage VP11。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案為：用于防治對蝦副溶血弧菌病的噬菌體，其特征在于包括如下步驟：

步驟A：宿主菌的分離純化，本發(fā)明的副溶血弧菌從大量南美白對蝦的病蝦腸道中分離獲得；