[發(fā)明專利]浙江金線蓮組織培養(yǎng)快速繁殖體系的建立方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710048795.7
• 申請日: 2017-01-23
• 公開（公告）號: CN106888965A
• 公開（公告）日: 2017-06-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳常理;金關(guān)榮;駱霞虹;唐楠楠;余楊;李珊;程舟;朱關(guān)林
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省蕭山棉麻研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司33200
• 代理人: 林松海

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組培領(lǐng)域，尤其是一種涉及浙江金線蓮組織培養(yǎng)體系的建立方法。

背景技術(shù)

浙江金線蓮（Anoectochilus zhejiangensis）為蘭科開唇蘭屬多年生珍稀草本植物，主要分布在浙江、福建等地，作為一種珍貴中草藥，具有廣闊的開發(fā)利用前景。浙江金線蓮的生物學(xué)特性及藥理活性與同屬基原植物金線蓮相近，對生長條件要求比較嚴格，自然萌發(fā)率不到千分之一，且自然繁殖時間長且繁殖率不高，再加上近年來人為大量采挖，導(dǎo)致浙江金線蓮野生資源日趨枯竭，因此保護野生浙江金線蓮已經(jīng)到了刻不容緩的地步。

植物組織培養(yǎng)是保護瀕危植物的有效技術(shù)手段，可在短時間內(nèi)繁殖出大量新生植株。在組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的篩選將直接影響到組織培養(yǎng)的成功與否，植物激素的濃度配比將直接影響到植株快繁的效率。因此培養(yǎng)基與激素配比的選擇對組織培養(yǎng)的成功與否具有重要作用。

迄今有關(guān)金線蓮基原植物，如中國臺灣金線蓮、金線蓮、福建金線蓮等快速繁殖體系的研究已有報道[王勇.金線蓮組織培養(yǎng)新體系建立及優(yōu)化.北方園藝,2010,13: 178-179；陳永快,林一心,鄒暉等.福建金線蓮和中國臺灣金線蓮的組培快繁技術(shù).現(xiàn)代園藝,2008,10:9-12.]，并發(fā)現(xiàn)不同基原植物間的快速繁殖體系相差較大，但是關(guān)于浙江金線蓮組織培養(yǎng)方面的研究尚屬空白。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本申請?zhí)峁┝艘环N浙江金線蓮組織培養(yǎng)快速繁殖體系的建立方法。

一種浙江金線蓮組織培養(yǎng)快速繁殖體系的建立方法，包括類原球莖誘導(dǎo)、增殖、分化及生根步驟，

其中，類原球莖的誘導(dǎo)、增殖及分化以MS為基本培養(yǎng)基，生根以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，加入植物生長調(diào)節(jié)劑，pH 5.8，液體培養(yǎng)基蔗糖質(zhì)量百分比濃度為5.0%，固體培養(yǎng)基蔗糖質(zhì)量百分比濃度為3.0%，類原球莖分化培養(yǎng)基中添加質(zhì)量含量10%香蕉泥；

１）類原球莖誘導(dǎo)：采用液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基，

液體培養(yǎng)基中含 TDZ 0.6 mg/L + NAA 0.4 mg/L；

固體培養(yǎng)基含TDZ 0.6 mg/L + NAA 0.2 mg/L + 6-BA 2.0 mg/L；

2）類原球莖增殖：

增值培養(yǎng)基中含稀效唑1.5 mg/L + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L，其中稀效唑是類原球莖增殖的主要因子；

3）類原球莖分化：對類原球莖進行分化培養(yǎng)，10天類原球莖球體頂部開始突起變尖，變綠，60 天后可分化成帶有莖節(jié)、葉片及幼小毛狀根的小苗，

分化培養(yǎng)基中含6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.1 mg/L；

4）植株生根：分化的幼苗在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)10 d后開始有根長出，生根培養(yǎng)基中含 NAA 1.0 mg/L + IBA 1.0 mg/L。

所述１）類原球莖誘導(dǎo)，取生長健康的無菌苗，在超凈工作臺上將其葉片從柄部切除，氣生根從基部切除，將莖切成含2-4個節(jié)的莖段。

所述１）類原球莖誘導(dǎo)，采用液體培養(yǎng)基，第一次接種3 天后即更換培養(yǎng)基，以后每7 天更換1次培養(yǎng)基，90 r/min，光照時間12 h/d，3000 lx，溫度為25℃。

所述類原球莖固體誘導(dǎo)、增殖、分化及生根的培養(yǎng)條件為：3000 lx，光照時間12 h/d，溫度為25℃。

本發(fā)明的有益效果是，為了解決資源稀缺問題，有必要建立其快速繁殖的最優(yōu)體系。因此本申請以浙江金線蓮為材料，探討不同植物激素配比對類原球莖誘導(dǎo)、增殖、分化及生根的影響，建立植株快速繁殖的最優(yōu)體系，為浙江金線蓮的擴大培養(yǎng)打下基礎(chǔ)，也為今后對浙江金線蓮成分等方面的研究及開發(fā)利用提供條件。同時研究結(jié)果對解決金線蓮基原植物資源保護與合理利用之間的矛盾具有一定的指導(dǎo)意義。

附圖說明

下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一步說明。

圖1是浙江金線蓮類原球莖的誘導(dǎo)圖；

圖2是浙江金線蓮類原球莖的增殖圖；

圖3是浙江金線蓮類原球莖分化圖；

其中A部分：分化培養(yǎng)10d；B部分：分化培養(yǎng)60d；

圖4 是60 d后浙江金線蓮的生根培養(yǎng)情況圖，

其中A部分：4號培養(yǎng)基；B部分：7號培養(yǎng)基；

圖5是120 d后浙江金線蓮的生根培養(yǎng)情況圖，

其中A部分：4號培養(yǎng)基，B部分：7號培養(yǎng)基；