[發明專利]建立健康人尿蛋白質組定量參考范圍的方法及健康人尿蛋白質組數據庫

有效

• 申請號: 201710048188.0
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN108334752B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 秦鈞;甄蓓;冷文川;倪曉天;路天元;王廣舜;孫長青;鐘博文
• 申請（專利權）人: 北京松果天目健康管理有限公司
• 主分類號: G16B50/30
• 分類號: G16B50/30
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.建立健康人尿蛋白質組定量參考范圍的方法，包括以下步驟：

1)采樣：采集統計數量健康人的尿樣；

2)制備尿蛋白樣品：將采集的每一個尿樣制成一個尿蛋白樣品；

3)檢測：對每一個尿蛋白樣品進行質譜檢測，得到每一個尿蛋白樣品的質譜數據；

4)搜庫及定量：對每一個尿蛋白樣品的質譜數據進行數據庫搜索、肽段定量及蛋白拼接組裝，確定每一個尿蛋白樣品中的蛋白種類及各蛋白的定量形成一個尿蛋白質組數據；

5)就不同人及不同采樣時間跨度確定不同的亞數據集，包括：將單個人不同采樣時間跨度的全部尿蛋白樣品的尿蛋白質組數據歸集得到該人的個體內尿蛋白質組亞數據集；將多人少次或單次采樣的全部尿蛋白樣品的尿蛋白質組數據歸集得到個體間尿蛋白質組亞數據集；

6)計算每一亞數據集內全部尿蛋白定量數據的變異系數的分布范圍用以評估個體內生理性波動；

7)利用隨機重采樣的方法，對采樣時間跨度最長的2個人的亞數據集進行分析，確定覆蓋健康人尿蛋白質組個體內生理性波動或差異所需的采樣個數；

8)將全部數量人數的亞數據集合并得到健康人尿蛋白質組數據的總數據集；每個亞數據集或總數據集中至少10％的尿樣中有定量信息的蛋白才參與評估各亞數據集或總數據集的尿蛋白質組個體間生理性波動和差異的評估；

9)利用總數據集的數據計算健康人尿蛋白質組定量參考范圍。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟9)中數據符合正態分布時，以參數法建立定量參考范圍，根據數據的統計學參數，即均值和標準差，計算覆蓋目標百分比人群的參考范圍上下限。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述目標百分比為95％，由均值加減2倍標準差計算得到。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟9)中數據不確定是否符合正態分布時，以非參數法建立定量參考范圍，按照百分位數法求出覆蓋目標百分比個體的參考范圍上下限。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：目標百分比為95％，根據第2.5和第97.5百分位數求出。

6.根據權利要求1或2或3或4或5所述的方法，其特征在于：就不同人及不同采樣時間跨度確定不同的亞數據集，人數較少采樣次數較多的尿樣形成的亞數據集用來評估少數人多次采樣的尿蛋白質組個體內生理性波動和差異；人數較多采樣次數較少的尿樣形成的亞數據集用來評估對多數人進行少次或單次采樣的尿蛋白質組個體間生理性波動和差異；男性和女性尿蛋白質組亞數據集用來評估不同性別的尿蛋白質組個體間生理性波動和差異。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述評估的方法是計算每個符合要求蛋白在相應亞數據集或總數據集中的變異系數，然后以箱型圖展示各亞數據集或總數據集中符合要求蛋白的變異系數的分布范圍，用以評估相應的尿蛋白質組個體間生理性波動和差異。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟2)采用基于超速離心和還原的方法得到尿蛋白樣品，即將尿樣離心后的沉淀用含50mM Tris和250mM蔗糖、pH8.5的重懸緩沖液重懸，再加入二硫蘇糖醇，加熱去除樣品中絕大部分的尿調素蛋白，用含10mM三乙醇胺和100mM氯化鈉、pH7.4的清洗緩沖液清洗后離心，得到的沉淀集為該尿樣的尿蛋白樣品。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：步驟3)將所述尿蛋白樣品用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離、膠切成6條帶進行膠內酶解，然后合并為2組分的肽樣品作為一個尿蛋白質組，利用LC-MS/MS對2組分肽樣品進行檢測，得到針對每一尿樣的尿蛋白樣品質譜數據；步驟4)搜庫的目的是對質譜產出的數據進行分析，確定質譜產出的數據中包含的蛋白，并得到所有肽段的一級定量結果，從而獲得每一尿蛋白樣品對應的蛋白質組數據。