[發明專利]檢測甲氰菊酯的試紙及其應用

有效

• 申請號: 201710047688.2
• 申請日: 2017-01-22
• 公開（公告）號: CN106918705B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發明（設計）人: 馮才偉;汪善良;扶勝;崔海峰;馮靜;徐念琴;楊梅;袁學偉;王江政;袁光宇;羅維超;徐明慧;楊昌松;冉茂乾;王吉平
• 申請（專利權）人: 貴州勤邦食品安全科學技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 江蘇海越律師事務所 32402
• 代理人: 唐小紅

1.一種檢測甲氰菊酯的試紙，包括樣品吸收墊(1)、結合物釋放墊(2)、反應膜(3)、吸水墊(4)和底板(7)，所述樣品吸收墊(1)、結合物釋放墊(2)、反應膜(3)、吸水墊(4)依次粘貼在底板(7)上，其特征在于所述反應膜上具有包被有甲氰菊酯半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線(5)和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線(6)，所述結合物釋放墊(2)包被有甲氰菊酯單克隆-膠體金標記物，所述甲氰菊酯半抗原-載體蛋白偶聯物由甲氰菊酯半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白或甲狀腺蛋白，所述甲氰菊酯半抗原是由甲氰菊酯與間羥基苯甲醛、氰化鉀、甲氰菊酰氯、對羥基苯丙酸反應合成得到，所示甲氰菊酯半抗原結構式如式(Ⅰ)所示，

所述甲氰菊酯半抗原具體制備步驟如下：

a)合成間苯氧基苯氰醇

將1.22g間羥基苯甲醛溶于50mL四氫呋喃中，冰浴攪拌下緩慢加入0.65g氰化鉀和0.76mL去離子水，繼續攪拌30min后，緩慢滴加2.1mL?2mol/L濃鹽酸，繼續攪拌1h，TLC法檢測反應過程，反應結束后，往反應液中加50mL去離子水，用二氯甲烷提取，有機相經無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾去除溶劑，得黃色油狀液體產物；

b)間羥基苯甲氰醇接甲氰菊酰氯

將步驟a)所得產物溶于50mL丙酮中，冰浴攪拌冷卻，另取3.54g甲氰菊酰氯溶于50mL二氯甲烷，加入到上述產物的丙酮溶液中，再加入2.14mL嘧啶，混合物繼續冰浴反應3h，反應完全后，依次用3mol/L鹽酸和去離子水洗滌反應液，用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸餾，得黃色油狀液體；

c)合成甲氰菊酯半抗原

將步驟b)產物溶于100mL?98％濃硫酸，再加入1.66g對羥基苯丙酸，100℃加熱回流反應6h，TLC檢測反應完全后，將反應液倒入冰中，用固體碳酸氫鈉調節pH至5.0，用乙酸乙酯提取，無水硫酸鈉干燥，產品用硅膠柱層析提純，收集得到甲氰菊酯半抗原。

2.如權利要求1所述的試紙，其特征在于所述結合物釋放墊(2)疊放于樣品吸收墊(1)下，并且結合物釋放墊(2)的1/3被覆蓋于樣品吸收墊(1)下。

3.如權利要求1或2所述的試紙，其特征在于所述甲氰菊酯單克隆抗體是以甲氰菊酯半抗原-載體蛋白偶聯物作為免疫原制備獲得，所述羊抗鼠抗抗體是由鼠源抗體免疫羊得到的。

4.一種權利要求1～3任一項所述試紙的制備方法，其包括以下步驟：

a)制備包被有甲氰菊酯單克隆抗體-膠體金標記物的結合物釋放墊(2)；

b)制備具有包被有甲氰菊酯半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線(5)和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線(6)的反應膜(3)；

c)將a)和b)制備好的結合物釋放墊(2)、反應膜(3)與樣品吸收墊(1)、吸水墊(4)和底板(7)組裝成試紙。

5.一種應用權利要求1～3任一項所述的試紙檢測茶葉樣品中甲氰菊酯殘留的方法，包括以下步驟：

a)茶葉樣品前處理；

b)用權利要求1～3任一項所述的試紙進行檢測；

c)分析檢測結果。