[發明專利]通用探針基因檢測方法及該探針和該探針的用途

有效

• 申請號: 201710045704.4
• 申請日: 2017-01-20
• 公開（公告）號: CN106591475B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 鐘英健;劉旭宏;王小波;陳月琴;陳建彬
• 申請（專利權）人: 廈門基科生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京雙收知識產權代理有限公司 11241
• 代理人: 王菊珍

本發明公開一種通用探針基因檢測方法及該探針和該探針的用途，上游引物中具有一段與通用探針配對的序列，并且，還具有一段內含與擬檢測的基因特性的序列相互補的序列，于是本發明的對擬檢測的具有基因特性的序列由上游引物承擔；面對不同的擬檢測的基因模板，需要檢測不同的擬檢測的基因特性序列時，只需調整上游引物中與該擬檢測的基因特性序列相互補的部分即可，上游引物中與探針配對的部分不必調整，所以，可以達成使用同一探針檢測不同擬檢測的基因特性序列，即達成了通用探針檢測基因的效果。

技術領域

本發明涉及基因檢測領域，尤其涉及一種通用探針基因檢測方法及該探針和該探針的用途。

背景技術

目前，采用基于基因擴增的基因特性檢測缺乏體系通用性，對于不同的擬檢測的基因模板必須設計與之相對應的探針。理論上，每更換一次擬檢測的基因模板就需要重新設計和制備一條新探針。這一方面造成成本增加，另一方面，由于不同實驗室對于同一擬檢測的基因模板用的檢測探針序列也可能各異，導致越來越難以比較不同時間、不同品牌檢測探針所獲得的結果。

發明內容

本發明的目的在于提供一種通用探針基因檢測方法，以便實現對不同的擬檢測的基因模板采用相同的檢測探針，消除現有技術中的不足。

為了達成本發明的上述目的，本發明的技術方案如下。

通用探針檢測基因的方法，該方法適用于基于基因擴增的基因特性檢測，所述通用探針是不與擬檢測的基因模板配對的一段序列；上游引物中具有一段與所述通用探針配對的序列，上游引物中還具有一段內含與擬檢測的基因特性的序列相互補的序列；所述通用探針帶有修飾基團；在所述基因擴增的過程中，檢測所述修飾基團的信號即能檢測到擬檢測的基因特性。

圖1示意了本發明方法的實現原理，示意了一個通用探針10以及上游引物20在本發明檢測方法中的演變，a至g共7處示意中實心箭頭連接著相鄰的過程。

圖1中，通用探針10具有一段探針序列11以及第一修飾基團12和第二修飾基團13；在本示意圖中，第一修飾基團12為熒光基團，第二修飾基團13為淬滅基團；探針序列11是不與擬測基因模板30配對也不與互補擬測基因模板40配對的一段序列；上游引物20中具有一段與探針序列11配對的探針互補序列21以及一段與擬測基因模板30的擬測基因特性序列配對的擬測基因互補序列22；擬測基因模板30的5’端是擬測基因特性序列32，該擬測基因特性序列32即是檢測的目標基因。

如圖1，在一個PCR的退火過程中，PCR載液中的游離的上游引物20與游離的通用探針10配對，展平通用探針10，使其熒光基團12與淬滅基團13分離，熒光基團12發出熒光信號，這一過程展示在a和b中。隨后，上游引物20攜帶通用探針10與擬測基因模板配對，c和d示意的擬測基因模板從退火到延伸的變化；在后續步驟中示意PCR變性階段，變性后獲得a中的通用探針(回歸游離狀態)、c中的擬測基因模板、d中的反向互補基因模板；變性后又再次進行退火和延伸，如f、g所示，下游引物50與反向互補基因模板配對，通用探針10被延伸出新的擬測基因模板30競爭性阻斷，重新游離在PCR載液中。由于上游引物20嵌入到反向互補基因模板40中無法回歸到游離狀態，所以經過圖1所示的一輪PCR反應過程，PCR載液中游離的上游引物20減少了，因為能夠和通用探針10配對的上游引物20不斷減少，游離狀態的通用探針10缺少了配對基礎，隨著PCR循環次數的增加，這減少越趨明顯，更多的通用探針10智能處于游離的卷曲狀態，能夠檢測到的熒光信號越來越少。

如上所述，該技術方案是技術方案一，主要對上游引物和通用探針賦予本發明的精神，若將該精神轉而賦予在下游引物和通用探針上能夠得到如下技術方案二。