[發(fā)明專利]一種利用抑菌培養(yǎng)基培育斑茅的組培方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710039964.0
• 申請日: 2017-01-18
• 公開（公告）號: CN106818479A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇亞春;楊穎穎;林慶良;許莉萍;闕友雄;高世武;郭晉隆;吳期濱
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 福州市眾韜專利代理事務(wù)所(普通合伙)35220
• 代理人: 陳智雄,黃秀婷

1.一種利用抑菌培養(yǎng)基培育班茅的組培方法，包括培養(yǎng)容器消毒、培養(yǎng)基配制、無菌水制備、誘導(dǎo)培養(yǎng)、分化及增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽，其特征在于：

(1)培養(yǎng)容器消毒：將培養(yǎng)瓶、瓶蓋及接種用的塑料盤在100mg/L次氯酸鈉+10mg/L環(huán)絲氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸鈉的水溶液中浸泡不少于10h，保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)培養(yǎng)基配制：誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1～5mg/L 2,4-D+40～100mg/L次氯酸鈉+0.5～2.0mg/L環(huán)絲氨酸+10～50mg/L特美汀+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；分化及增殖培養(yǎng)基為：MS+0.1～2mg/L IBA+0.5～2mg/L KT+40～100mg/L次氯酸鈉+0.5～2.0mg/L環(huán)絲氨酸+10～50mg/L特美汀+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；生根培養(yǎng)基為1/2MS+1～4mg/L IAA+40～100mg/L次氯酸鈉+0.5～2.0mg/L環(huán)絲氨酸+10～50mg/L特美汀+0.1～0.5mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；所述MS，為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養(yǎng)基；所述IBA，指α-吲哚丁酸；所述KT，指6－糠氨基嘌呤；所述2,4-D，指2,4-二氯苯氧乙酸；所述IAA，指吲哚乙酸；配制培養(yǎng)基時，先稱各培養(yǎng)基配方中的蔗糖和瓊脂粉，加培養(yǎng)基總重量1/2的自來水，加熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養(yǎng)基配方配齊其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調(diào)pH值至5.8，分裝到消毒過的培養(yǎng)容器中，封口，冷卻凝固后備用；

(3)無菌水的制備：采用次氯酸鈉、環(huán)絲氨酸、十二烷基磺酸鈉和水配制無菌水，終濃度為100mg/L次氯酸鈉、10mg/L環(huán)絲氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸鈉，現(xiàn)配現(xiàn)用；

(4)誘導(dǎo)培養(yǎng)：取田間生長健壯且無病蟲害的班茅無性系莖梢?guī)~鞘的部位，用體積比為75％的乙醇表面消毒，剝離外層葉鞘，取白色心葉的肥厚帶中生長點(diǎn)以上5cm內(nèi)的幼嫩心葉，將其切成不超過3mm厚度的圓片，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30d后誘導(dǎo)出愈傷組織；培養(yǎng)室溫度為26℃，暗培養(yǎng)；

(5)分化及增殖培養(yǎng)：將誘導(dǎo)出的班茅愈傷組織轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中，30d后逐步分化出幼芽；將幼芽接種到增殖培養(yǎng)基上，逐步發(fā)育成叢生苗，每15d轉(zhuǎn)接一次，可以達(dá)到大量增殖的效果；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強(qiáng)度為1500Lx；

(6)生根培養(yǎng)：取高度為3～5cm苗，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)25d后成為完整植株；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強(qiáng)度為1800Lx；

(7)瓶苗移栽：將生根培養(yǎng)獲得的完整植株取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍的多菌靈浸泡30min后，移栽至透水性好的基質(zhì)中，大棚上層用遮光網(wǎng)遮蓋，移栽的環(huán)境溫度為22～28℃，所述透水性好的基質(zhì)，如草木灰:沙子:耕作土＝1:1:1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用抑菌培養(yǎng)基培育班茅的組培方法，其特征在于所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+4.0mg/L 2,4-D+60mg/L次氯酸鈉+1.0mg/L環(huán)絲氨酸+30mg/L特美汀+0.3mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用抑菌培養(yǎng)基培育班茅的組培方法，其特征在于所述分化及增殖培養(yǎng)基為：MS+1.0mg/L IBA+1.0mg/L KT+60mg/L次氯酸鈉+1.0mg/L環(huán)絲氨酸+30mg/L特美汀+0.3mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用抑菌培養(yǎng)基培育班茅的組培方法，其特征在于所述生根培養(yǎng)基為1/2MS+3.0mg/L IAA+60mg/L次氯酸鈉+1.0mg/L環(huán)絲氨酸+30mg/L特美汀+0.3mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8。