[發明專利]一種抗癌活性肽變體及其應用

在審

• 申請號: 201710033729.2
• 申請日: 2017-01-17
• 公開（公告）號: CN106589097A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 李露青
• 申請（專利權）人: 李露青
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地說，本發明涉及抗癌活性肽變體。

背景技術

多肽抗癌藥物是近年來抗癌藥物研發的熱點。現有技術中，專利申請ZL200710035478.8從新疆穴居狼蛛粗毒中分離純化獲得的抗癌活性肽，為24肽。這種多肽能誘導細胞凋亡殺滅多種癌細胞，并能抑制癌細胞增殖，但對正常細胞和動物毒性較弱；同時還可抑制低氧誘導因子HIFα轉錄活性，從而抑制腫瘤組織血管再生，有效的抑制實體瘤生長；其抗癌活性具有高效低毒的特點，對于開發治療肺癌、肝癌、子宮頸癌等實體瘤的藥物有著較好的應用前景。

現有技術中，為了提高多肽的活性，針對多肽序列進行特異性的改變，從而尋找活性更高的變體是常規的做法。為了進一步提高該多肽的生物活性，申請人通過大量的實驗，針對該申請獲得的多肽進行了氨基酸的改變，從而獲得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的變體。

發明詳述

本發明涉及的多肽，序列如下:

NB：RKGWFKAMKSIAKFIAKEKLKEHL；

(NB1)：RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

(NB 2)：RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS；

(NB 3)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLSS；

(NB 4)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKEKEHLS；

(NB 5)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS；

(NB 6)：SRKGSFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS；

(NB 7)：SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS；

(NB 8)：SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS；

(NB 9)：RKGWAKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

(NB 10)：RKGWAKAMKSFAKFIAKEKLKEHL；

(NB 11)：RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHL；

(NB 12)：RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHLS；

(NB 13)：RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS；

(NB 14)：RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

對照1：RKGWFKAMKSWAKFIAKEKLKEHL；

對照2：RKGWSKAMKSIAKFIAKEKLKEHL。

本發明的多肽合成后，可以做成游離態形式，也可以做成陽離子鹽，如：TFA鹽(三氟乙酸鹽)，HCl鹽(鹽酸鹽)，醋酸鹽形式。

本發明的多肽，可以選擇和一種或多種藥物載體組合，制成多種藥物劑型，用于治療。這些藥物劑型涵蓋：注射溶液、片劑、霜劑、膠囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身給藥。劑量優選在10-5～10-2mg/kg體重的范圍內，以0.1％-0.5％的較高濃度全身或局部給藥。對于具體治療的最佳劑量的確定是本領域技術人員熟知的。

具體實施方式

實施例1：本發明多肽的人工化學合成

通過常規的合成方法，合成了本發明多肽，經質譜鑒定顯示純度較高，與設定序列的多肽分子結構相同。

實施例2：多肽殺滅癌細胞實驗

通過MTT分析法測定了本發明多肽對Hela、CNE1和JB6 3種細胞株的毒性。作用濃度為40微摩爾本發明多肽。為了進一步驗證，采用溶血實驗檢測本發明多肽對于正常細胞的毒性，結果顯示200微摩爾本發明多肽只能裂解約15％的紅細胞，說明本發明多肽對于正常細胞毒性較弱。在整體動物水平，我們也檢測了本發明多肽的毒性，以200毫克/kg體重皮下注射小鼠沒有出現明顯的毒性反應(48小時內)，表明本發明多肽毒性較低，對于癌細胞具有較強的選擇性。

采用Annexin V-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶雙染法檢測了本發明多肽殺滅癌細胞的機制，發現本發明多肽可誘導Hela細胞凋亡，未經藥物處理的Hela細胞凋亡較少，說明本發明多肽通過誘導細胞凋亡殺滅癌細胞。

本發明多肽對3中細胞株的殺滅結果

實施例3本發明多肽抑制裸鼠荷瘤生長