[發(fā)明專利]一種麻瘋樹無菌苗各組織誘導愈傷的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710032480.3
• 申請日: 2017-01-16
• 公開（公告）號: CN106857247B
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發(fā)明（設計）人: 惠文凱;陳曉陽;楊源通;何霞;王益;張夢潔;劉明騫
• 申請（專利權）人: 華南農業(yè)大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣東廣信君達律師事務所 44329
• 代理人: 楊曉松

本發(fā)明公開一種麻瘋樹無菌苗各組織的誘導愈傷的方法。該方法首先利用L₁₆(4⁴)正交實驗設計配制愈傷誘導培養(yǎng)基，再將麻瘋樹無菌苗的子葉接種于上述培養(yǎng)基中，連續(xù)觀察愈傷誘導效果，然后將真葉、帶真葉的葉柄、莖段、子葉、帶子葉的葉柄、子葉葉柄、帶葉柄下胚軸和下胚軸接種于愈傷組織誘導培養(yǎng)基中誘導愈傷組織，并觀察愈傷誘導效果。該方法可實現(xiàn)15d內對無菌苗各組織，尤其是對子葉、莖段、帶子葉的葉柄、帶葉柄的下胚軸的大量愈傷組織實現(xiàn)快速誘導。本發(fā)明對無菌苗形態(tài)學上的各種組織均有顯著的愈傷誘導效果且誘導時間短，可實現(xiàn)一種配方對多種組織的快速誘導，節(jié)省了麻瘋樹的組培快繁時間，且提高了無菌苗材料的利用效率。

技術領域

本發(fā)明屬于植物生物技術領域，更具體地，涉及一種麻瘋樹無菌苗各組織誘導愈傷的方法。

背景技術

近年來，伴隨著經濟的快速發(fā)展，能源需求的巨大缺口已經升級為一個國際性的大問題。因此，為了人類的可持續(xù)發(fā)展，尋找和開發(fā)具有可再生能力的生物質能源日益成為21世紀農業(yè)科技革命的新亮點。大戟科植物(Euphorbiaceae)麻瘋樹(Jatropha curcasL.)是一種含油量較高的重要木本油料植物，其種子含油量約為30～40％，種仁含油量達50～70％。

目前，麻瘋樹育種與生產上還存在種子產量低下、含油量較低、油脂組分比例不佳等問題，因此，積極完善繁育與栽培技術，解決麻瘋樹大規(guī)模生產中的實際問題，是培育優(yōu)質高產的新品種的基本環(huán)節(jié)和關鍵步驟。由于麻瘋樹遺傳起源不夠清晰，遺傳多樣性相對較低等種質資源的局限性，采用傳統(tǒng)的育種方法存在耗時長且效率低等問題，難以取得突破性進展。另外，以高通量測序為核心的現(xiàn)代生物基因工程技術，雖然可以快速獲得育種所需目標性狀相關的基因序列，但仍然需要高效的再生體系以實現(xiàn)麻瘋樹的遺傳轉化和隨后的良種選育及其大量擴繁研究。因此，開發(fā)高效的麻瘋樹組織培養(yǎng)再生體系是麻瘋樹功能基因組學研究和優(yōu)質麻瘋樹遺傳材料快速擴繁的必要前提。

近些年，對有關麻瘋樹愈傷組織誘導的技術所用外植體材料龐雜，主要以葉片和莖段為主，但不同材料所需愈傷誘導的配方差異較大，且誘導效果參差不齊。另外，現(xiàn)有技術配方誘導愈傷耗時較長，限制了麻瘋樹組培快繁體系建立的整體時間周期。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術中的不足和缺陷，提出一種麻瘋樹無菌苗各組織誘導愈傷的方法。該方法可實現(xiàn)15d內對無菌苗各組織，尤其是對子葉、莖段、帶子葉的葉柄、帶葉柄的下胚軸的大量愈傷組織實現(xiàn)快速誘導。本發(fā)明對無菌苗形態(tài)學上的各種組織均有顯著的愈傷誘導效果且誘導時間短，可實現(xiàn)一種配方對多種組織的快速誘導，節(jié)省了麻瘋樹的組培快繁時間，且提高了無菌苗材料的利用效率。

本發(fā)明上述目的通過以下技術方案予以實現(xiàn)：

一種麻瘋樹無菌苗各組織誘導愈傷的方法，包括如下具體步驟：

S1.選取麻瘋樹種子，去除種皮后對種仁進行消毒；

S2.配制MS培養(yǎng)基，并于121℃滅菌15～20min，取出放置于無菌操作室冷卻，待培養(yǎng)基凝固后使用；

S3.在消毒后種仁的子葉頂端位置切口，露出子葉頂端，將處理后的種仁插入播種在步驟S2的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使切口端不接觸培養(yǎng)基，培養(yǎng)20d后得到麻瘋樹無菌苗的子葉；培養(yǎng)30d后得到無菌苗的真葉、帶真葉的葉柄、莖段、子葉、帶子葉的葉柄、子葉葉柄、帶葉柄下胚軸和下胚軸；

S4.切取步驟S3培養(yǎng)的麻瘋樹無菌苗的子葉，將子葉的葉片切為塊狀，將塊狀子葉混合后，接種于愈傷組織誘導培養(yǎng)基中，各處理10瓶重復，每瓶2～5片子葉，在溫度22～28℃，光照12h/d，光照強度2000～2500lx條件下愈傷誘導5～20d，觀察麻瘋樹子葉愈傷組織的誘導情況；