[發明專利]一種a?氰基丙烯酸酯細胞毒性檢測方法

在審

• 申請號: 201710028389.4
• 申請日: 2017-01-16
• 公開（公告）號: CN106755267A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 楊春;鄧紹平
• 申請（專利權）人: 電子科技大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;A61K49/00
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

1.一種a-氰基丙烯酸酯細胞毒性檢測方法，其特征在于，主要包括a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細胞毒性體外實驗、a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細胞毒性動物實驗以及聚丙烯補片應用a-氰基丙烯酸酯膠進行固定效果實驗，其中a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細胞毒性體外實驗主要包括以下步驟：

（1）取真皮層成纖維細胞和間皮細胞進行培養基培養；

（2）在預定時間點（每月2日、4日、7日、10日、14日、21日、28日的0時、6時和24時）取步驟1中的樣本進行依次進行洗滌、分散、再洗滌、離心；

取步驟2中的懸濁液并加入10ml的a-氰基丙烯酸酯膠和6ml 的PBS混合液后繼續播種到培養基上并在37°C環境的密封內孵化5 h后進行進行染色處理，同時在顯微鏡下觀察細胞形態，并對流式細胞術檢測并計算細胞數，同時在a-氰基丙烯酸酯膠與PBS混合液混合時進行甲醛測定；

所述的細胞毒性動物實驗主要包括以下步驟：

（1）取新西蘭兔人為造成腹部缺陷，包括腹前壁(右和左側面)內部和外部斜肌和橫向肌肉，腹橫筋以及腹膜壁層，并均分為觀察組以及對照組；

（2）將觀察組采用a-氰基丙烯酸酯膠粘劑處理固定，將對照組采用縫合處理；

（3）將觀察組以及對照組的在培養14天后制作標本顯微鏡下觀察模型部分細胞特征并對比；

所述聚丙烯補片應用a-氰基丙烯酸酯膠進行固定效果實驗主要包括以下步驟：

（1）將需要縫合的患者均為為兩組，一組為對照組，另一組為觀察組；

（2）將觀察組患者應用聚丙烯補片和a-氰基丙烯酸酯膠進行固定，將對照組患者應用聚丙烯補片和縫合的方式進行固定；

（3）對對照組與觀察組的患者進行術后血液指標（白細胞、中性粒細胞）、生化指標（AST、ALT、BUN、Cr）以及術后隨訪并發癥監測。

2.根據權利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯細胞毒性檢測方法，其特征在于，a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細胞毒性體外實驗中的甲醛測定主要在室溫條件下并放在封閉的環境中，在預定時間點將50ul樣本置于96孔板中，加入甲醛試劑進行孵育30分鐘，同時在在535nm光照處測定甲醛的量。

3.根據權利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯細胞毒性檢測方法，其特征在于，a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細胞毒性體外實驗中的培養基包括低糖杜爾貝科培養基、10%的胎牛血清營養液、抗生素（10000U/ml的青霉素，10000ug/ml的鏈霉素和25ug/ml的兩性霉素），且每3天更換新的培養液。

4.根據權利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯細胞毒性檢測方法，其特征在于，a-氰基丙烯酸酯膠粘劑生物相容性和細胞毒性體外實驗中樣本分離和計算主要是孵育完的待測溶液首先進行洗滌去培養液后，加入胰蛋白酶進行吹打分散，然后上離心機以1000r/min離心7分鐘，加入2ml染色液后再進行離心，取懸濁液上流式機，細胞計算采用流式細胞術，最終計算出細胞水平，判定a-氰基丙烯酸酯是否具有細胞毒性。

5.根據權利要求1所述的a-氰基丙烯酸酯細胞毒性檢測方法，其特征在于，聚丙烯補片應用a-氰基丙烯酸酯膠進行固定效果實驗所選取患者不包括患有血液學、肝臟、腎臟疾病。