[發明專利]一種檢測FTOrs79206939基因多態性的引物及其PCR方法

在審

• 申請號: 201710024743.6
• 申請日: 2017-01-13
• 公開（公告）號: CN106868108A
• 公開（公告）日: 2017-06-20
• 發明（設計）人: 黃民;王雪丁;管少興;鄭洪;朱霞;溫鼎聲;張財斌;胡品津;高翔;郅敏;晁康
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 陳衛

技術領域

本發明屬于醫學生物技術領域。更具體地，涉及一種檢測FTO rs79206939基因多態性的引物及其PCR方法。

背景技術

巰基嘌呤類藥物以６－巰基嘌呤（6-mercaptopurine）、６－硫鳥嘌呤（6-thioguanine）以及其前體形式硫唑嘌呤（Azathioprine）為代表，對血液性腫瘤、炎癥性腸病、絨毛膜上皮癌和惡性葡萄胎的治療均有很好的療效，除此之外，也被廣泛運用于外科、消化內科以及皮膚科等多種臨床常見病治療。

但是，該類藥物在體內的代謝復雜，療效和毒性均存在個體差異，不良反應發生率較高，包括骨髓抑制、肝臟損害、胃腸紊亂、胰腺炎和流行感冒樣癥狀等。研究發現，盡管很多因素，例如：性別、年齡、肝腎功能等都可能影響藥物治療的最終結果，但基因仍是造成個體用藥差異的要原因。

目前，對巰嘌呤類藥物代謝酶及轉運體基因多態性研究較為深入，例如TPMT基因多態性可能預測其不良反應發生。但是存在，突變率低，敏感性低，臨床應用前景并不十分明朗。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服上述現有技術的缺陷和不足，提供一種用PCR方法檢測FTO rs16957920基因多態性位點的引物對FTOF/FTOR。可以根據電泳結果確定FTO rs16957920基因多態性位點的基因型，結合個體的其他生物學指標對于巰基嘌呤類藥物的療效和副作用進行預測，克服了臨床選擇巰基嘌呤類藥物的盲目性，在基因型分析的基礎上可以預測患者使用巰基嘌呤類藥物的有效性和安全性，指導臨床用藥，使患者能夠進行個體化醫療。

本發明的另一目的是提供上述引物對FTOF/FTOR在制備通過PCR擴增生物樣品檢測FTO rs16957920基因多態性位點的試劑中的應用。

本發明的再一目的是提供一種包含上述引物對FTOF/FTOR的FTO rs16957920基因多態性位點檢測試劑盒。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

一種用PCR方法檢測FTO rs16957920基因多態性位點的引物對FTOF/FTOR，其序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

上述引物對FTOF/FTOR在檢測生物樣品FTO rs16957920基因多態性位點方面的應用，也在本發明的保護范圍之內。

一種通過PCR擴增生物樣品檢測FTO rs16957920基因多態性位點的方法，是以待測生物樣品的DNA為模板，以上述引物對FTOF/FTOR進行PCR擴增，根據擴增結果確定FTO rs16957920基因多態性位點的基因型。

其中，所述待測生物樣品為患者外周血。

優選地，所述PCR擴增的反應體系為25μl，包括：DNA模板3μl，10×Taq buffer 2.5μl，0.25mmol/L dNTPs 2μl，10μmol/L上下游引物各1μl，5U/μl ExTaq? 0.15μl，余量ddH₂O。

優選地，所述PCR擴增的反應條件為：94℃ 5min；94℃ 30s，66℃ 30s，72℃ 1mins，35個循環；72℃ 6min；4℃保存。

另外，上述引物對FTOF/FTOR在制備通過PCR擴增生物樣品檢測FTO rs16957920基因多態性位點的試劑盒中的應用，以及包含上述引物對FTOF/FTOR 的FTO rs16957920基因多態性位點檢測試劑盒，也在本發明的保護范圍之內。

優選地，所述試劑盒還含有dNTPs、ExTaq聚合酶。

優選地，所述試劑盒還含有0.25mmol/L的dNTPs、5U/μl的ExTaq聚合酶。

本發明上述引物對FTOF/FTOR以及用PCR方法檢測FTO rs16957920基因多態性位點的方法和試劑盒，可以用于檢測FTO rs16957920基因多態性位點的基因型。

本發明的引物對FTOF/FTOR以及用PCR方法可以檢測FTO rs16957920基因多態性，FTO rs79206939基因多態性與巰嘌呤類藥物導致的白細胞減少有關，與藥物不良反應有關，因此，可以根據擴增電泳結果確定FTO rs16957920基因多態性位點的基因型，對巰基嘌呤類藥物的療效和副作用進行預測，預測患者使用巰基嘌呤類藥物的有效性和安全性，指導臨床用藥，使患者能夠進行個體化醫療。

本發明具有以下有益效果：