[發明專利]與小麥旗葉長QTL QFll.sicau-2D緊密連鎖的分子標記及應用

有效

• 申請號: 201710022694.2
• 申請日: 2017-01-12
• 公開（公告）號: CN106755465B
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發明（設計）人: 劉亞西;陶陽;林宇;王智強;石浩然;武方琨;楊希蘭;魏育明;鄭有良
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.與小麥旗葉長QTL QFll.sicau-2D緊密連鎖的分子標記，其特征在于，其為分子標記HRM6，核苷酸序列如SEQ ID No:1所示；分子標記HRM6與小麥旗葉長QTL QFll.sicau-2D之間的遺傳距離為0.01cM，二者共定位于小麥2D染色體上標記MK10324和MK2107之間0.71cM區段內，小麥旗葉長QTL QFll.sicau-2D能顯著增加小麥旗葉長，LOD值大于5.26，解釋23％的表型變異。

2.用于熒光定量PCR擴增權利要求1所述分子標記的引物對，其特征在于，包括上游引物和下游引物，序列分別如SEQ ID No:2-3所示。

3.權利要求1所述分子標記在小麥育種中的應用。

4.權利要求2所述引物對在篩選或鑒定長旗葉小麥品種中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測小麥的基因組DNA；

2)以待測小麥的基因組DNA為模板，設計用于熒光定量PCR擴增所述分子標記的引物對，進行熒光定量PCR擴增；所述引物對包括上游引物和下游引物，序列分別如SEQ ID No:2-3所示；

3)分析PCR擴增產物，進行基因分型。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟2)中熒光定量PCR擴增反應體系：SsoFast EvaGreen超混合液5μL、上游引物和下游引物各300ng、模板DNA 100ng、Dnase/RNase-free去離子水加至總量為10μL；

熒光定量PCR擴增程序：95℃預變性5min；94℃變性15s、55℃退火30s，共50個循環；熔解曲線范圍為65～95℃，每0.2℃讀一次數，時間為10s。

7.根據權利要求5或6所述的應用，其特征在于，步驟3)利用高分辨熔解曲線進行基因分型，含有小麥旗葉長QTL QFll.sicau-2D的小麥品種均出現與小麥H461相同的熔解曲線，而不含有小麥旗葉長QTL QFll.sicau-2D的小麥品種均出現與小麥H461明顯不同的熔解曲線。

8.權利要求2所述引物對在鑒定小麥旗葉長QTL QFll.sicau-2D中的應用。

9.權利要求2所述引物對在小麥分子標記輔助育種中的應用。