[發(fā)明專利]一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201710019880.0 | 申請日： | 2017-01-11 |
| 公開（公告）號： | CN106591366A | 公開（公告）日： | 2017-04-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 卿志榮;鄭幫;郭帥;修朝陽 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海睿玻生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/867 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 200233 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 篩選 sgrna 基因 試劑盒 方法 | ||
1.一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法，其特征在于，所述試劑盒包括：
用于快速測定sgRNA介導基因組修飾活性的質(zhì)粒載體pCAG-mCherry-Luc；
用于快速測定sgRNA介導基因組修飾活性的質(zhì)粒載體lentiCRISPRv2。
2.一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法，包括試劑A和試劑B,其特征在于：所述的試劑A含有pCAG-mCherry-Luc質(zhì)粒載體，試劑B含有l(wèi)entiCRISPRv2質(zhì)粒載體。
3.如權(quán)利要求2所述的一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法，其特征在于，所述的pCAG-mCherry-Luc為本發(fā)明所改造的質(zhì)粒載體，其序列為SEQ ID NO:1。
4.如權(quán)利要求2所述的一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法，其特征在于，所述的pCAG-mCherry-Luc質(zhì)粒載體雙酶切位點優(yōu)選的為BamHI及EcoRI內(nèi)切酶。
5.如權(quán)利要求2所述的一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法，其特征在于，所述的lentiCRISPRv2質(zhì)粒的通用酶切位點的為BsmB1內(nèi)切酶。
6.一種快速篩選sgRNA的基因敲除試劑盒及方法，其特征在于，包括以下操作步驟：
(1)細胞轉(zhuǎn)染所用質(zhì)粒的構(gòu)建，所述的細胞轉(zhuǎn)染所用質(zhì)粒的構(gòu)建包括pCAG-target-mCherry-Luc和lentiCRISPRv2-sgRNA質(zhì)粒的構(gòu)建；
(2)細胞轉(zhuǎn)染，細胞轉(zhuǎn)染所用的細胞優(yōu)選的為HEK293FT；
(3)熒光素酶活性的檢測；
(4)驗證sgRNA篩選系統(tǒng)在慢病毒系統(tǒng)中的有效性。
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