[發(fā)明專利]一種豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710019645.3
• 申請日: 2017-01-11
• 公開（公告）號: CN108303541B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設計）人: 左青山;宋啟超;紀良心;劉聰;李炎暉
• 申請（專利權）人: 上海鳴捷生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京深川專利代理事務所(普通合伙) 16058
• 代理人: 謝雪梅

本發(fā)明公開了一種豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測試劑盒及其檢測方法，本發(fā)明的試劑盒采用磁性微粒包被的抗原、發(fā)光標記物標記的蛋白與待測樣本中的抗體發(fā)生特異性反應而進行待測樣品中抗體含量的測定。本發(fā)明的試劑盒實現(xiàn)豬圓環(huán)病毒2型抗體的定量檢測，靈敏度高，檢測范圍寬，快速，重復性好，全自動操作及高通量檢測的效果。

技術領域

本發(fā)明涉及豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測技術領域，尤其涉及一種豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測試劑盒及采用該試劑盒進行檢測的檢測方法。

背景技術

豬圓環(huán)病毒2型(Porcine?circovirus?type?2，PCV2)是目前發(fā)現(xiàn)的最小的動物病毒，病毒粒子直徑約17nm，為共價閉合，環(huán)狀，單股DNA病毒，PCV具有兩種基因型：PCV1和PCV2。PCV1無致病性，但廣泛存在于豬體內和豬源傳代細胞系，PCV2對豬有致病性，主要引發(fā)斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post-weaning?multisystemic?wasting?syndrome，PMWS)。除了引發(fā)PMWS外，PCV2還與仔豬先天性震顫、豬皮炎腎炎綜合征、豬呼吸道綜合征(PDNS)、母豬繁殖障礙等疾病相關。自1991年在加拿大首次報道以來，許多國家和地區(qū)都報道了該病的發(fā)生。近年來，該病的發(fā)生呈上升趨勢，給世界的養(yǎng)豬業(yè)造成了相當大的經(jīng)濟損失。

在我國，免疫接種是防治豬圓環(huán)的主要策略。豬圓環(huán)病毒Cap蛋白起著重要的作用，也是必須的結構蛋白，免疫后能產(chǎn)生保護性中和抗體。免疫后豬圓環(huán)病毒抗體效價與攻毒保護具有明顯的相關性，所以通過抗體水平的監(jiān)測來制定合理、有效的免疫程序是提高群體免疫水平的保證。

豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白是豬圓環(huán)主要的中和性抗原蛋白，其抗體是疫苗免疫后抗體水平的監(jiān)測和病毒感染后抗體水平檢測的主要標的，抗體水平高低與其免疫或感染狀況直接相關，所以有豬圓環(huán)病毒2型抗體定量檢測的現(xiàn)實需求。現(xiàn)有的檢測機構有獸醫(yī)站、疫苗公司、養(yǎng)殖場等存在著大量的樣本，也對大通量的豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測試劑盒和儀器有著需求。現(xiàn)有的ELISA、膠體金等的方法難以滿足。

目前建立并應用的豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測方法有ELISA方法、病毒中和試驗、免疫熒光法、膠體金試紙條等方法，其中ELISA方法目前是豬圓環(huán)病毒2型抗體最常用的方法，ELISA所測OD值的范圍在0.1-3.5，限定了所測量的抗體范圍較窄，只能做到半定量，反應的時間通常在2小時左右，時間較長；病毒中和試驗是通過豬圓環(huán)病毒2型和抗體在細胞上中進行抗原抗體反應來判定抗體滴度，能較全面反映中和抗體的高低，全過程為病毒滴定、抗體中和、結果判定等過程需5-7天時間，全過程只能人工來操作、判定，重復性差；免疫熒光法通常也是在細胞上操作，存在靈敏度不高，重復性差等缺點；膠體金方法能快速得出結果，但是只能定性，難以定量，限制了應用范圍。

專利CN104237513A(公布日為2014.12.24)公開了一種甲狀腺過氧化物酶抗體磁微粒化學發(fā)光免疫定量檢測試劑盒，包括TPO-Ab校準品，TPO-Ab稀釋液，偶聯(lián)有鏈霉親和素的磁性微粒懸浮液，生物素標記的TPO-Ab抗原，鼠抗人酶標結合物，TPO-Ab質控品，化學發(fā)光液A和B，20倍濃縮洗液和反應管，該試劑盒對甲狀腺過氧化物酶抗體的含量進行定量測定，實現(xiàn)靈敏度高，特異性，精密性，穩(wěn)定性良好的效果。該試劑盒在人抗體上應用廣泛，但在動物抗體上還未有報道。

目前豬圓環(huán)Cap抗體檢測主要采用的是半定量的ELISA方法并不能滿足定量需求，這一點主要是由于缺乏豬圓環(huán)Cap抗體標準品和定量標準、沒有準確可重復性的檢測方法造成的。與獸醫(yī)不同，在人醫(yī)領域，各個疾病的標志物，例如上述的甲狀腺過氧化物酶抗體，都已經(jīng)得到充分研究，建立了通用的國家標準、國際標準或行業(yè)標準，定量簡單易行，因此不同廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品得到了規(guī)范，檢測結果一致性較好。而在獸醫(yī)領域，目前的豬圓環(huán)Cap抗體檢測市場大部分被進口的ELISA定性檢測試劑占據(jù)，并且各廠家的產(chǎn)品檢測結果相差很大，不利于畜牧養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展，亟需建立定量標準以及準確可靠重復性佳的檢測方法。

發(fā)明內容