[發明專利]一種豬圓環病毒2型抗體檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201710019645.3
• 申請日: 2017-01-11
• 公開（公告）號: CN108303541B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 左青山;宋啟超;紀良心;劉聰;李炎暉
• 申請（專利權）人: 上海鳴捷生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 北京深川專利代理事務所(普通合伙) 16058
• 代理人: 謝雪梅

1.一種豬圓環病毒2型抗體檢測試劑盒，其特征在于，包括豬圓環病毒2型Cap蛋白偶聯或間接偶聯磁性微粒的溶液，發光標記物標記的蛋白溶液和發光底物；

所述豬圓環病毒2型Cap蛋白選自豬圓環病毒Cap蛋白全長、豬圓環病毒Cap蛋白片段、豬圓環病毒Cap蛋白多肽中的一種，所述的磁性微粒為以Fe₃O₄為核心，表面覆有聚合物涂層，并導入羧基或甲基磺?；钚曰鶊F的微粒；

所述磁性微粒的直徑為1-3μm，所述磁性微粒直徑CV3%;

所述豬圓環病毒2型Cap蛋白與所述磁性微粒的最適用量為1.0-5nmol/10mg?磁性微粒；

所述試劑盒中還包括稀釋液，質控品，校準品和清洗液，稀釋液選自緩沖液、牛血清白蛋白、阻斷劑、單克隆抗體，多克隆抗體中的一種或多種的組合；

所述質控品為豬圓環病毒2型抗體低值質控品和高值質控品，所述低值質控品的質控范圍為22-36U/mL，高值質控品的質控范圍為92-142U/mL；所述清洗液為0.05mol/L?pH為8.0的三羥甲基氨基甲烷緩沖液或0?.01mol/L?pH為7?.0的磷酸鹽緩沖液，所述三羥甲基氨基甲烷緩沖液和磷酸鹽緩沖液中分別含有0.1％的Tween-20。

2.如權利要求1所述的豬圓環病毒2型抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述豬圓環病毒2型Cap蛋白偶聯磁性微粒的溶液制備方法包括如下步驟：

S1，取含磁性微粒的溶液，采用緩沖液清洗磁性微粒，并懸浮于緩沖液中；

S2，加入純化的豬圓環病毒2型Cap蛋白；

S3，加入交聯劑或催化劑，振蕩反應；

S4，磁鐵吸附磁性微粒，洗滌，懸浮在含有封閉劑的溶液中。

3.如權利要求1所述的豬圓環病毒2型抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述豬圓環病毒2型Cap蛋白間接偶聯磁性微粒的溶液的制備方法包括如下步驟：

1)磁性微粒結合親和素

S1，取含磁性微粒的溶液，采用緩沖液清洗磁性微粒，并懸浮于緩沖液中；

S2，加入親和素；

S3，加入交聯劑或催化劑，振蕩反應；

S4，磁鐵吸附磁性微粒，洗滌，懸浮在含有封閉劑的溶液中，構成磁性微粒-親和素復合物；

2)豬圓環病毒2型Cap蛋白結合生物素

S1，取豬圓環病毒2型Cap蛋白，透析；

S2，加入生物素，反應；

S3，加入封閉劑，反應；

S4，透析除去未結合的生物素，獲得豬圓環病毒2型Cap蛋白-生物素；

3)磁性微粒-親和素與豬圓環病毒2型Cap蛋白-生物素復合物混合，通過親和素與生物素的結合力連接磁性微粒與豬圓環病毒2型Cap蛋白。

4.如權利要求1所述的豬圓環病毒2型抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述發光標記物標記的蛋白溶液的制備方法包括如下步驟：

S1，取與豬圓環病毒2型Cap蛋白或豬圓環病毒2型抗體特異性結合的蛋白，透析；

S2，加入發光標記物，反應；

S3，加入封閉劑，反應；

S4，透析分離未結合的發光標記物。

5.如權利要求1所述的豬圓環病毒2型抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述發光標記物選自吖啶酯、堿性磷酸酶、過氧化物酶中的任意一種，所述發光標記物標記的蛋白選自豬圓環病毒2型Cap抗原、單克隆抗體、多克隆抗體、基因工程抗體、抗豬IgG抗體、抗豬IgM抗體中的任意一種。

6.如權利要求1所述的豬圓環病毒2型抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述發光底物與發光標記物一一對應。