[發(fā)明專利]用于谷胱甘肽測(cè)定的雙芳基并咪唑類熒光探針的合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710008774.2
• 申請(qǐng)日: 2017-01-06
• 公開（公告）號(hào): CN106770125B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 雷英杰;艾翠玲;張國(guó)春;丁玫;姚慶佳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 天津佳盟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.一種用于谷胱甘肽測(cè)定的雙芳基并咪唑類熒光探針的合成方法，其特征在于以相鄰二胺和間雙醛為原料，以蜜胺甲醛樹脂負(fù)載硫酸為催化劑，微波輔助通過縮合反應(yīng)制備，步驟如下：

1)將濃度為37wt％的甲醛溶液與烏洛托品混合，攪拌下加入三聚氰胺，甲醛溶液、烏洛托品與三聚氰胺的質(zhì)量比為1:0.013:3.5，升溫到80℃反應(yīng)0.5-1小時(shí)，利用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH至8.5，冰水浴冷卻，得到無色透明的樹脂粘稠液；將上述樹脂粘稠液溶解到丙酮中，樹脂粘稠液與丙酮的質(zhì)量比為1:50-60，攪拌下緩慢加入濃度為98wt％的硫酸，樹脂粘稠液與硫酸的質(zhì)量比為1:7-8，加完后繼續(xù)反應(yīng)30min，靜置，將固體抽濾，乙醚洗滌3次，60℃干燥，得到蜜胺甲醛樹脂負(fù)載硫酸催化劑；

2)將鄰苯二胺或鄰萘二胺與取代4-羥基-1,3-苯二醛混合，取代4-羥基-1,3-苯二醛的結(jié)構(gòu)式為：

鄰苯二胺或鄰萘二胺與取代4-羥基-1,3-苯二醛的質(zhì)量比為2:1，然后按20mol％的量加入蜜胺甲醛樹脂負(fù)載硫酸催化劑，經(jīng)研磨混合均勻后放入微波儀中，800W功率下，微波輻射15-20min，TLC跟蹤反應(yīng)進(jìn)程；反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至室溫，攪拌下加入乙醇，乙醇與蜜胺甲醛樹脂負(fù)載硫酸催化劑的質(zhì)量比為20：1，靜置0.5-1h析出樹脂沉淀，抽濾；濾液經(jīng)減壓濃縮后硅膠色譜柱分離，得到目標(biāo)化合物，其結(jié)構(gòu)為式(Ⅲ)或(Ⅳ)，

2.一種由權(quán)利要求1所述的合成方法所合成的2,4-雙芳基并咪唑基苯酚類熒光化合物的應(yīng)用，其特征在于用于生理環(huán)境下谷胱甘肽巰基活性分子的檢測(cè)，方法如下：

1)利用雙芳基并咪唑官能團(tuán)捕獲體系中二價(jià)銅離子形成銅配合物，使得探針的熒光強(qiáng)度顯著淬滅，其結(jié)構(gòu)為式(Ⅰ)或(Ⅱ)：

分別取化合物(Ⅰ)或(Ⅱ)溶于二甲基亞砜中至濃度為3μmol·L^-1，向96孔板中分別加入500nmol·L^-1到500μmol·L^-1硫酸銅溶液，振蕩器充分混勻，反應(yīng)30min后在酶標(biāo)儀上測(cè)定熒光強(qiáng)度，然后根據(jù)數(shù)據(jù)繪出熒光強(qiáng)度對(duì)應(yīng)銅離子濃度工作圖；

2)利用氧化型或還原型谷胱甘肽與二價(jià)銅離子更強(qiáng)的配位效應(yīng)，在該銅配合物熒光體系中加入谷胱甘肽類巰基活性分子，使得2,4-雙芳基并咪唑基苯酚與銅離子的配位分解而游離發(fā)光團(tuán)的熒光性能恢復(fù)，其結(jié)構(gòu)為式(Ⅲ)或(Ⅳ)：

3)在上述濃度為3μmol·L^-1的化合物(Ⅰ)或(Ⅱ)與500nmol·L^-1到500μmol·L^-1范圍內(nèi)不同濃度硫酸銅溶液的96孔板中，分別加入0到1000μmol·L^-1還原型谷胱甘肽GSH溶液，振蕩器充分混勻，反應(yīng)30min后在酶標(biāo)儀上測(cè)定熒光強(qiáng)度，然后根據(jù)數(shù)據(jù)繪出熒光強(qiáng)度與GSH濃度的線性關(guān)系圖。