[發明專利]擬缺香茶菜酮在制備細胞凍存液的應用和方法

在審

• 申請號: 201710001138.7
• 申請日: 2017-01-03
• 公開（公告）號: CN106689117A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 劉文友
• 申請（專利權）人: 鄭州漢東科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種擬缺香茶菜酮在制備細胞凍存液的應用和方法，屬于生物領域，特別是細胞培養領域。

背景技術

擬缺香茶菜 Isodon excisoides (Sun ex C. H. Hu) C. Y. Wu et H. W. Li 別名野紫蘇，為唇形科（Labiatae）香茶菜屬 Rabdosia (Bl.) Hassk.植物，產于湖北、四川、云南。其味辛、苦，性平，具祛風活血、解毒消腫功效，主要用于治療感冒頭痛、風濕痹痛、跌打瘀腫、骨折、外傷出血、毒蛇咬傷。關于該植物化學成分研究報道較少。李火云等對擬缺香茶菜 Isodon excisoides 全草的化學成分進行研究，分離得到 24 個化合物，其中化合物1鑒定為：

(E)-5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl) pent-1-en-3-one，該化合物 為新化合物，命名為擬缺香茶菜酮。其分子結構為：

。

本發明發現擬缺香茶菜酮在制備細胞凍存液的應用和方法，其適用于免疫細胞長期保存，并能夠在復蘇后保持其細胞特性。

發明內容

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明的一個目的在于提出一種擬缺香茶菜酮在制備細胞凍存液的應用和方法，其可降低適用于免疫細胞長期保存，并能夠在復蘇后保持其細胞特性。

擬缺香茶菜酮為：

(E)-5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-5-(4-hydroxyphenyl) pent-1-en-3-one，其分子結構為：

。

根據本發明的一個方面，本發明提供了一種細胞凍存液。根據本發明實施例，該細胞凍存液凍存的細胞種類不受特別的限制，只要凍存液能用于長期保存細胞即可。

作為本發明的一個技術方案，該凍存液包括0.5體積%的DMSO，0.005-0.008體積%的擬缺香茶菜酮；DMSO是二甲基亞砜， 用途廣泛。用作乙炔、芳烴、二氧化硫及其他氣體的溶劑以及腈綸纖維紡絲溶劑。是一種即溶于水又溶于有機溶劑的極為重要的非質子極性溶劑。對皮膚有極強的滲透性，有助于藥物向人體滲透。也可作為農藥的添加劑。也是一種十分重要的化學試劑。

DMSO也是一種滲透性保護劑，能夠降低細胞冰點，減少冰晶的形成，減輕自由基對細胞損害，改變生物膜對電解質、藥物、毒物和代謝產物的通透性。

但研究表明，DMSO存在一定的毒性作用，與蛋白質疏水基團發生作用，導致蛋白質變性，具有血管毒性和肝腎毒性。及余量培養基。因此，從安全角度考慮，應該盡量降低其使用量。

本發明人驚奇的發現，擬缺香茶菜酮可以顯著減少DMSO的使用量，該凍存液能夠有效用于保存細胞，尤其是免疫細胞，并且凍存時間長（凍存時間可達幾年甚至更長），細胞復蘇后依然保持良好的細胞活力，活性好，細胞回收率高，尤其適用于大規模免疫細胞的冷凍保存。

本發明的有益之處在于：

本發明公開了一種擬缺香茶菜酮在制備細胞凍存液的應用和方法，其可降低DMSO的用量，降低毒性，增加安全性，而且不需要使用血漿，無傳染源，適用于免疫細胞長期保存，并能夠在復蘇后保持其細胞特性。

具體實施方式

下面將結合實施例對本發明的方案進行解釋。本領域技術人員將會理解，下面的實施例僅用于說明本發明，而不應視為限定本發明的范圍。實施例中未注明具體技術或條件的，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。

實施例1：

分離獲得臍帶血單個核細胞，將單個核細胞細胞接種到加有20ml培養基的培養瓶中，培養基配比為：18ml OpTmizer? CTS? T-cell expansion SFM培養基+2ml自體血漿（Autologous plasma）+終濃度1000IU/ml Pepro Tech IL-2+終濃度0.01KE/ml沙培林（OK432），37℃，5%CO₂無菌培養，記為第0天。每日觀察細胞，并進行適當傳代擴增，培養基配比為培養基配比為：OpTmizer? CTS? T-cell expansion SFM培養基+10%自體血漿（Autologous plasma）+終濃度1000IU/ml Pepro Tech IL-2，誘導擴增得到免疫細胞。

免疫細胞的凍存和復蘇方法：