[發明專利]一種免疫微球層析快速HIT抗體檢測試紙

在審

• 申請號: 201710000252.8
• 申請日: 2017-01-03
• 公開（公告）號: CN108267591A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 郝存;范秋蘋;潘志紅;張寧;高巍巍;陳美艷;南洋;田茹;汪廷楓
• 申請（專利權）人: 普邁德（北京）科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及臨床肝素誘導的血小板減少癥(HIT)檢測的技術領域，具體涉及了一種免疫微球層析肝素/血小板因子4抗體檢測試紙。包括如下步驟：制備抗體復合物；試紙條載體膜的準備，蛋白A乳膠顆粒制備,反應墊的制備、樣品墊標記、分離膜組裝、試紙條的組裝、臨床樣本檢測,并將干燥的試紙條置于鋁箔袋內。本發明HIT抗體的側流免疫檢測方法具有較高成本效益，并定量檢測和評估HIT抗體在患者的體液中的水平。該方法用于POCT檢測系統，以及篩選或檢測患者體液中HIT抗體的滴度變化以確定對HIT敏感的檢測方法，能夠使HIT抗體檢測技術成為臨床常規檢測項目。

技術領域

本發明涉及肝素誘導的血小板減少癥檢驗技術領域，尤其涉及一種免疫微球層析快速HIT抗體檢測試試紙制備方法。

背景技術

HIT是一種抗體介導的綜合征，有較高的發病率和致死率，過去由于很多醫生沒有足夠的認識及難以確診常被認為是一種罕見疾病。并且除了肝素外也無更好的治療手段。HIT的發病率高低主要與肝素使用時間，肝素類型，使用途徑，患者類型，性別及人種等因素相關。

有關HIT的發病機制還不是很明確，目前普遍認為是血循環中出現肝素樣化合物時，PF4(血小板因子4)即以高親和力與之結合，形成肝素-PF4(H-PF4)復合物(肝素失去活性)。H-PF4復合物形成后，其構象發生改變(松散，在第3、4個半胱氨酸殘基間暴露出多個抗原表位，機體內發生免疫反應，產生免疫球蛋白IgG，IgA,IgM)——IgG-H-PF4復合物。IgG-H-PF4復合物結合到血小板膜受體上——大量血小板激活和聚集及血小板數量下降。血小板廣泛激活后，其囊泡內顆粒釋放——激活凝血系統，凝血酶形成增加?；罨难“迮c凝血因子相互作用——血栓形成。

HIT與其它原因誘導產生的血小板減少癥相比，HIT患者血小板計數常>20*10^9.發作時間在使用肝素后5～14天。

HIT的主要并發癥不是因血小板減少導致的出血性疾病，而是因血小板抗體原因機體處于高凝狀態，病理性血栓形成。且動脈血栓栓塞發生率極高。另外，HIT有50％的風險會導致一系列的并發癥，血栓多發生于靜脈。例如雙下肢深部靜脈血栓形成、肺栓塞、肢端靜脈壞疽fingers,toes,penis,or nipples、心梗、卒中、腸系膜動脈血栓、四肢局部缺血及截肢(Circulation 1999；100:587-93)。

另外，部分患者局部肝素注射部位可出現痛性紅斑或皮膚壞死。急性血小板激活(寒戰、肌痛、發熱、心動過速、大汗及惡心等，罕見癥狀有急性一過性遺忘。)HIT相關死亡率約為18％。但是，正確的管理可以減少發病率和死亡率。

HIT目前尚無確診方法。但目前常用的方法為根據臨床表現進行4TS評分(表1)評估結合實驗室檢查排除HIT陰性患者，Warkentin通過血小板計數、發生時間、血栓情況以及血小板的可能原因四個因素設計了簡明4Ts評分表，經過不斷演變和大量研究驗證，高概率(評分6～8分)陽性預測值為0.64；低概率(評分≤3分)陰性預測值為0.998。用于初步排除可疑HIT被廣泛應用于臨床，并得到指南推薦。

由于目前HIT陽性確診較為困難，因此，快速，高NPV的PF4-H檢測作為陰性排除手段則顯得尤其重要！

目前西方國家采用的HIT抗體檢測試劑主要為ELISA方法，該方法在國外臨床篩查中非常普及，但由于需要專業的檢測人員，操作復雜，耗費時間長，陽性預測值不高。流式細胞術HITKit和SRA放射免疫方法產品因臨床操作復雜，檢測報告時間過長，臨床普及程度較低，HemosIL公司的免疫比濁法HIT-Ab(PF4-H)經過臨床實踐后，具有很好的實驗室應用價值，但是該方法為大型凝血儀檢測項目，不適合用于床旁POC，臨床需要更便捷快速的方法進行檢測，Stago公司的STic Expert和Akers Biosciences公司的PIFAPlussPF4^TM可用于臨床快速POCT檢測，但是HIT抗體沒有被定量檢測，臨床檢測敏感度低。