[發明專利]一種免疫微球層析快速HIT抗體檢測試紙

在審

• 申請號: 201710000252.8
• 申請日: 2017-01-03
• 公開（公告）號: CN108267591A
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發明（設計）人: 郝存;范秋蘋;潘志紅;張寧;高巍巍;陳美艷;南洋;田茹;汪廷楓
• 申請（專利權）人: 普邁德（北京）科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種免疫微球層析快速HIT抗體檢測試紙，可以在臨床幫助診斷患者中肝素誘導的血小板減少癥抗體，包括使用即時免疫層析定量或定性測定患者中肝素-PF4復合物誘導的免疫球蛋白抗體的體液水平是否高于預定范圍，其特征在于，包括如下步驟：

S1、制備肝素-PF4復合物，將緩沖液配制的肝素制劑與血小板4因子在室溫條件按照以下體積比1:1-1:5但不限于該比例進行混合孵育，向反應液中加入10％-50％的糖類物質作為穩定劑；

S2、蛋白A顆粒制備,選用但不限于染色后的乳膠微球、熒光微球、制備包被有蛋白A用于顯色，便于儀器定量或定性檢測肝素/PF4抗體濃度；

S3、反應膜的制備，其特征在于反應墊包括但不限于NC膜，硝酸纖維膜、醋酸纖維膜，反應墊上質控線與檢測線各一條，檢測線固定噴涂有S1步驟肝素/PF4復合物，質控線固定噴涂有人免疫球蛋白抗體。

S4、樣品墊制備,應用但不限于玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜、NC膜，用一種或幾種防腐劑、表面活性劑、血清白蛋白、氯化鈉、糖類試劑進行浸泡，置于37-56℃干燥處理，儲存于密封包裝袋中待用；

S5、顆粒標記的樣品墊，在干燥后的S4樣本墊近端標記S2中的蛋白A顆粒試劑，置于37-56℃干燥處理；

S6、血液分離膜組裝，將測試條的樣品墊上加入血液分離膜，用于分離血細胞，允許分離后的血漿或血清進入樣品墊；

S7、試紙條的組裝，將S5中標記蛋白A的樣本墊組裝到帶有黏膠載體塑料板一端，用力按壓，將一種不限于硝酸纖維素膜或NC膜組裝于試紙條中部，試紙條的另一端粘貼吸水膜，維持樣品側向層析，將試紙條放入塑料盒中，將樣品墊的一段放置在塑料盒底部，吸水紙一端固定于塑料盒頂端；

臨床樣本檢測，室溫下在試紙條的樣品墊部位加入全血樣本，反應；

在步驟S1中的制備肝素-PF4復合物，肝素制劑和血小板因子4的緩沖液包括但不限于磷酸鹽、Tris、HEPES等常規的緩沖液。

在步驟S1中肝素制劑和血小板因子4的混合比例包括但不限于體積比1:1-1:5進行混合反應，

在步驟S1中加入的糖類物質包括但不限于加入蔗糖、海藻糖、葡萄糖等糖類，糖類物質加入比例包括但不限于10％-50％。

在步驟S2中的蛋白A顆粒制備的顯色顆粒包括但不限于染色微球、熒光微球。

在步驟S3中的樣品墊處理試劑表面活性劑包括但不限于吐溫、曲拉通等，血清白蛋白包括但不限于牛血清白蛋白、人血清白蛋白等，糖類物質包括但不限于加入蔗糖、海藻糖、葡萄糖等糖類。

2.根據權利要求1所述的測試樣本是全血或成分血液。

3.根據權利要求1所述的一種免疫微球層析快速HIT抗體檢測試紙制備方法，其特征在于，微球或顯色顆粒粒徑包括但不限于0.1-1微米。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于試紙條中部的纖維素膜上分布有檢測線和質控線。

5.根據權利要求1所述的顯色顆粒標記為重組蛋白A標記顆粒。

6.根據權利要求4所述的檢測線標記有S1步驟中的肝素/PF4復合物。

7.根據權利要求4所述的質控線標記有重組蛋白A抗體，該抗體特異性結合重組蛋白A標記顆粒。