[發明專利]在經修飾的酵母中生產甾醇

有效

• 申請號: 201680082413.6
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN109154015B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 漢斯-彼得·霍曼;雷吉納·萊伯;馬丁·萊瑪恩;科琳娜·奧達爾;芭芭拉·佩特斯查徹爾;哈拉德·皮希勒;比吉特·普羅爾
• 申請（專利權）人: 帝斯曼知識產權資產管理有限公司
• 主分類號: C12P33/00
• 分類號: C12P33/00;C12N9/10
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

1.一種生產甾醇混合物的方法，其中基于甾醇的總量，所述甾醇混合物包含至少87%的7-脫氫膽甾醇（7-DHC），所述方法包括在適合甾醇產生的條件下培養酵母細胞，其中：

（a）ERG5和ERG6被失活，且

（b）ARE2的活性被降低或消除，且

（c）對烯膽甾烷醇、酵母甾醇或三烯醇具有甾醇Δ24-還原酶活性的EC 1.3.1.72的酶被異源表達，其中所述具有甾醇Δ24-還原酶活性的EC1.3.1.72的酶源自植物或脊椎動物。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述方法用于生產如下甾醇混合物，基于甾醇的總量，所述甾醇混合物中存在的酵母甾醇的量為約3%或更少。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述方法用于生產包含膽甾-5,7,24(25)-三烯醇和酵母甾醇的甾醇混合物，其中所述甾醇混合物中存在的膽甾-5,7,24(25)-三烯醇與酵母甾醇之間的比例在7至1的范圍內。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述具有甾醇Δ24-還原酶活性的EC1.3.1.72的酶源自人類、豬、狗、小鼠、大鼠、馬或斑馬魚。

5.根據權利要求1或2所述的方法，還包括降低或消除ARE1活性。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其中編碼甾醇?；D移酶ARE1和ARE2的內源性基因被消除。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其中7-DHC被進一步轉化為維生素D3。

8.一種使甾醇混合物中酵母甾醇的量減少的方法，所述方法包括：

（a）使ERG5和ERG6失活，和

（b）降低或消除ARE2的活性，和

（c）表達對烯膽甾烷醇、酵母甾醇或三烯醇具有甾醇Δ24-還原酶活性的EC 1.3.1.72的異源酶，其中所述具有甾醇Δ24-還原酶活性的EC1.3.1.72的異源酶源自植物或脊椎動物；

所述方法還包括在適合甾醇產生的條件下培養酵母細胞，其中所述酵母甾醇的量是與培養ARE2有活性的酵母細胞相比較。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述具有甾醇Δ24-還原酶活性的EC1.3.1.72的異源酶源自人類、豬、狗、小鼠、大鼠、馬或斑馬魚。

10.根據權利要求8或9所述的方法，還包括降低或消除ARE1活性。

11.根據權利要求8或9所述的方法，其中編碼甾醇?；D移酶ARE1和ARE2的內源性基因被消除。

12.根據權利要求8或9所述的方法，其中7-DHC被進一步轉化為維生素D3。