[發明專利]基于內皮素-1受體的內皮素-1海綿

在審

• 申請號: 201680079556.1
• 申請日: 2016-01-22
• 公開（公告）號: CN109071677A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 阿爾瓊·吉恩
• 申請（專利權）人: 阿爾瓊·吉恩
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;A61P15/00;A61P9/00;A61P9/10;A61P25/28
• 代理公司: 廣州市天河區倪律專利代理事務所(普通合伙) 44348
• 代理人: 倪小敏;何錦標

提供了能夠結合內皮素?1以形成非功能性復合物的融合多肽，其包括融合多肽的氨基酸序列。所述融合多肽將被連接至人IgG1的Fc部分以形成二聚體，該二聚體將用作內皮素?1拮抗劑（內皮素?1海綿）。

背景技術

內皮素-1是由多種細胞合成和分泌的血管活性肽，并且因此涉及多種靶組織中的信號傳導事件(Nelson et al. 2003)。內皮素-1在生理功能中起關鍵作用。然而，在升高的水平下，內皮素-1誘導病狀，并且因此涉及許多不同的疾病，包括神經退行性疾病、心血管疾病、以及妊娠期疾病，如先兆子癇(Jain 2013, Jain et al. 2012)。鑒于這些疾病的一個關鍵特征是內皮素-1水平升高，一種被提出的治療性干預的策略是靶定內皮素-1水平的增加。為此，能夠結合內皮素-1以形成非功能性復合物的融合多肽將用作內皮素-1拮抗劑。這些內皮素-1拮抗劑（稱為內皮素-1海綿（sponge））的構建需要將內皮素-1受體配體結合結構域融合至人IgG1的Fc部分。

內皮素-1通過結合至內皮素A（ETA）和內皮素B（ETB）受體而發揮其作用，這兩種高度同源的細胞表面蛋白屬于G蛋白偶聯受體超家族(Karet and Davenport 1994)。這兩種受體在一級結構中具有約60％的相似性(Nelson et al. 2003)，即兩種受體彼此表現出高的多肽序列同一性。然而，這兩種受體基于其配體結合結構域而在配體結合選擇性方面顯示出明顯的區別。

內皮素-1結合至ETA受體：

內皮素-1結合至ETA受體被認為需要ETA受體N-末端環、細胞外環1（ECL1）、細胞外環2（ECL2）、細胞內環3（ICL3）、細胞外環3（ECL3）和C-末端結構域(Adachi et al. 1993)。這些ETA受體配體結合結構域的氨基酸序列在圖1中給出。

ECL1中的5個氨基酸序列（140-Lys Leu Leu Ala Gly-144）已被認為是配體結合所需的最重要元件。此外，發現ECL2和ECL3（包括側翼跨膜區）在配體選擇中起重要作用。

Orry等（2000）還構建了ET-1肽與ETA受體相互作用的模型，其中ET-1與N-末端受體結構域和2個不同的細胞外環接觸。

此外，位于第七跨膜區附近的C末端8個氨基酸殘基和第三個細胞內環中的C末端16個氨基酸殘基對內皮素-1結合很重要(Adachi et al. 1993)。

內皮素-1結合至ETB受體：

內皮素-1結合至ETB受體需要N末端結構域中的Pro93和ETB受體的第一個細胞內環中的Cys131之間的39個氨基酸(Klammt et al. 2007)。此外，近端細胞質尾部中Ser390至Leu401的12個氨基酸對于維持配體結合位點處于活性形式是必需的(Wada et al. 1994)。

此外，已經提出位于跨膜結構域2和3（TM2+3）中的從Ile138至Ile197的60個氨基酸序列對于配體結合可能也是重要的。這些ETB受體配體結合結構域的氨基酸序列在圖2中給出。

構建內皮素-1海綿

1. 可以通過將上述ETA受體配體結合結構域融合進融合多肽，然后將所述融合多肽融合至人IgG1的Fc部分，從而構建內皮素-1海綿（圖3）。

2. 可以通過將上述ETB受體配體結合結構域融合進融合多肽，然后將所述融合多肽融合至人IgG1的Fc部分，從而構建內皮素-1海綿（圖4）。

3. 可以通過將ETB受體配體結合結構域與ETA受體配體結合結構域融合進融合多肽，然后將所述融合多肽融合至人IgG1的Fc部分，從而構建內皮素-1海綿（圖5）。

本發明提供了能夠結合內皮素-1以形成非功能性復合物的融合多肽的氨基酸序列，包括：

融合至人IgG1的Fc部分的