[發明專利]SynP159，用于基因在視桿光感受器中特異性表達的啟動子

有效

• 申請號: 201680077464.X
• 申請日: 2016-12-01
• 公開（公告）號: CN108430519B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: D·哈特爾;D·舒伯勒;B·羅斯卡;A·克雷布斯;J·于特納
• 申請（專利權）人: 弗里德里克·米謝爾生物醫學研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;C12N15/85
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

本發明提供分離的核酸分子，其包含SEQ ID NO:1的核酸序列或與SEQ ID NO:1的所述序列具有至少80％同一性的至少400bp的核酸序列，或由SEQ ID NO:1的核酸序列或與SEQ ID NO:1的所述序列具有至少80％同一性的至少400bp的核酸序列組成，其中，當所述分離的核酸分子可操作地連接編碼基因的核酸序列時，所述分離的核酸分子特異性地導致所述基因在視桿光感受器中的表達。

發明領域

本發明涉及導致基因在視桿光感受器細胞中特異性地表達的核酸序列。發明背景

為了表達目的，通常將重組基因作為活性表達盒中的cDNA構建體，轉染至靶細胞、細胞群或組織中，以允許異源基因轉錄。該DNA構建體被細胞轉錄機器識別，識別過程涉及許多反式作用轉錄因子(TF)在順式調控元件的活性，所述順式調控元件包括增強子、沉默子、絕緣子和啟動子(在本文中總稱為“啟動子”)。

基因啟動子涉及所有這些調控水平，通過整合DNA序列的影響、轉錄因子結合和表觀遺傳特征，作為基因轉錄中的決定子。它們決定例如由質粒載體編碼的轉基因表達的強度以及其中將要表達所述轉基因的細胞類型。用于驅動哺乳動物細胞中的異源基因表達的最常見啟動子是人和小鼠巨細胞病毒(CMV)主要立即早期啟動子。它們給予強表達并且已經在幾個細胞類型中證實是穩健的。其他病毒啟動子，如SV40立即早期啟動子和勞斯肉瘤病毒(RSV)長末端重復(LTR)啟動子，也常常用于表達盒中。

替代病毒啟動子，也可以使用細胞啟動子。已知的啟動子包括，來自編碼高豐度轉錄的細胞轉錄物的管家基因的啟動子，所述轉錄物如β-肌動蛋白、延伸因子-1α(EF-1α)或泛素。與病毒啟動子相比，真核基因表達更復雜并且需要許多不同因子的精確協作。

涉及內源性調控元件用于轉基因表達的一個方面是，穩定的mRNA的產生和表達可以在宿主細胞的天然環境中進行，因此所述宿主細胞中提供反式作用轉錄因子。由于真核基因的表達受順式-和反式-作用調控元件的復雜機制控制，因此大部分細胞啟動子缺乏廣泛的功能表征。真核啟動子的部分通常位于其轉錄的序列的緊上游并且作為轉錄起始點。核心啟動子直接地圍繞轉錄起始位點(TSS)，其足以被轉錄機制識別。近端啟動子(proximal promoter)包括核心啟動子上游的區域并含有TSS和轉錄調控需要的其他序列部分。轉錄因子通過結合啟動子和增強子序列中的調控基序表現為序列特異性，并且由此激活染色質和組蛋白修飾酶，這改變核小體結構及其位置，最終允許轉錄的啟動。功能性啟動子的鑒別主要取決于相關上游或下游增強子元件的存在。

涉及內源性調控元件用于轉基因表達的另一個關鍵方面是一些啟動子可以以細胞特異性方式起作用并將導致轉基因在特定類型的細胞中表達，或根據啟動子，在特定細胞子集中表達。

因此，本發明的一個目的是獲得適用于在哺乳動物細胞中以高表達水平和細胞類型特異性方式表達重組基因的新序列。這樣的序列解決本領域對于視網膜細胞特異性啟動子的需求，以研發用于神經退行性疾病、視力恢復、藥物發現、腫瘤治療和疾病診斷研究的系統。

發明概述

本發明人通過結合表觀遺傳學、生物信息學和神經科學，來發現在眼中時僅在視桿光感受器中驅動基因表達的啟動子。

本發明序列的核酸序列為：