[發明專利]細胞判定方法、細胞判定裝置及細胞判定程序

有效

• 申請號: 201680053584.6
• 申請日: 2016-06-22
• 公開（公告）號: CN108026563B
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 深見正;山田秀直
• 申請（專利權）人: 浜松光子學株式會社
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12M1/34;G01N21/45;G02B21/00
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 楊琦

本發明涉及一種細胞判定方法，所述細胞判定方法根據細胞內的糖原的含量判定細胞種類，并且具備：取得步驟，測定細胞的光路長度，取得光路長度數據；計算步驟，根據得到的光路長度數據，計算出與細胞的光路長度相關的光路長度指標；比較步驟，將計算出的光路長度指標與閾值進行比較；和判定步驟，根據比較的結果，判定細胞是細胞內的糖原含量多的細胞種類或者是細胞內的糖原含量少的細胞種類。

技術領域

本發明涉及細胞判定方法、細胞判定裝置及細胞判定程序。

背景技術

來自人的胚胎干細胞(ES細胞)及誘導多能干細胞(iPS細胞)等干細胞具有分化成多種細胞的能力(多能性)，期待在藥物開發領域、醫療領域中的應用。進行從干細胞分化誘導成目標細胞時的分化效率大大依賴于作為起始材料的干細胞的狀態。即，如果干細胞維持多能性、沒有保持未分化的狀態，則分化誘導的效率降低。因此，為了將這些干細胞進行產業應用，管理干細胞的品質極為重要，需要監控干細胞，非侵入性地判定狀態。

已知ES細胞在未分化狀態下厭氧地使用糖酵解系統而產生三磷酸腺苷(ATP)。另外，如果進行分化，則主要成為通過利用了檸檬酸循環(TCA循環)的氧化磷酸化的ATP供給(非專利文獻1)。已知ES細胞與分化后的細胞相比葡萄糖需求性更高，而且細胞質含有糖原(非專利文獻2)。

作為糖原的檢測方法，已知有古典組織化學染色(PAS染色：Periodic acidSchiff stain，系氏高碘酸染色)(例如，非專利文獻2)。另外，在非專利文獻3中，報道有通過拉曼分光成像，對ES細胞的細胞質中的糖原進行定量。

現有技術文獻

非專利文獻

非專利文獻1：Cell Stem Cell，2013年，第12卷，pp.127-137.

非專利文獻2：J.Anat.，2004年，第205卷，pp.247-255.

非專利文獻3：Anal.Chem.，2011年，第83卷，pp.6254-6258.

發明內容

發明所要解決的課題

PAS染色法需要細胞的染色，因此，無法實現非侵入性的觀察。在非專利文獻3所記載的拉曼分光成像中，能夠不對細胞進行染色而觀察。然而，由于拉曼散射光的光強度極弱，所以觀察所需要的照明光強度也強，有可能對細胞造成損傷。另外，在拉曼分光成像中，難以從來自培養基中的各種成分的拉曼散射光，將細胞特異性的拉曼散射光分光，無法直接觀察培養基中的細胞。

本發明是鑒于這些問題而做出的，其目的在于提供能夠根據細胞內的糖原的含量，非侵入且簡便地判定細胞種類的細胞判定方法、細胞判定裝置及細胞判定程序。

用于解決課題的技術手段

本發明提供一種細胞判定方法，其為根據細胞內的糖原的含量判定細胞種類的細胞判定方法，具備：取得步驟，測定細胞的光路長度，取得光路長度數據；計算步驟，根據得到的光路長度數據，計算出與細胞的光路長度相關的光路長度指標；比較步驟，將計算出的光路長度指標與閾值進行比較；和判定步驟，根據比較的結果，判定細胞為細胞內的糖原含量多的細胞種類或者是細胞內的糖原含量少的細胞種類。

本發明的細胞判定方法是基于細胞內的糖原含量越多則光路長度越長的關系的發現。在此，“光路長度”與“相位差”或“光學厚度”相同意思。

根據本發明的細胞判定方法，能夠根據細胞內的糖原的含量，非侵入且簡便地判定細胞種類。另外，由于以光路長度為指標，所以能夠直接判定培養基中的細胞。

上述取得步驟也可以是由細胞的定量相位顯微鏡圖像測定光路長度，取得光路長度數據的步驟。