[發明專利]蛋白質保持擴展顯微法

有效

• 申請號: 201680051406.X
• 申請日: 2016-08-05
• 公開（公告）號: CN108139408B
• 公開（公告）日: 2020-08-28
• 發明（設計）人: P·W·蒂爾伯格;F·陳;E·S·博伊登;C-C·余
• 申請（專利權）人: 麻省理工學院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N1/36
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務所 11313
• 代理人: 郗名悅;張波

1.一種用于感興趣的樣品的蛋白質的保持和成像的方法，其包括以下步驟：

(a)使用雙官能交聯劑處理所述樣品，其中所述雙官能交聯劑包含蛋白質反應性化學基團和可溶脹材料反應性化學基團；

(b)使用包含可溶脹材料的前體的組合物滲透所述樣品；

(c)啟動所述前體的聚合以形成可溶脹材料，其中所述雙官能交聯劑結合至所述樣品內的蛋白質并且結合至所述可溶脹材料，從而所述蛋白質錨定到所述可溶脹材料；

(d)使所述樣品經受消化；

(e)使所述可溶脹材料溶脹以形成擴展樣品；以及

(f)對所述擴展樣品成像。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述雙官能交聯劑是6-((丙烯酰基)氨基)己酸的琥珀酰亞胺酯(AcX)。

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述消化是所述樣品的物理、化學或酶破壞。

4.根據權利要求1或3所述的方法，還包含所述樣品的抗體染色的步驟。

5.根據權利要求4所述的方法，其中在使用所述雙官能交聯劑處理之前，所述樣品用一種或多種抗體染色。

6.根據權利要求4所述的方法，其中在所述樣品處于擴展狀態后，所述樣品用一種或多種抗體染色，并且所述消化保存蛋白質抗原性。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述樣品表達一種或多種熒光蛋白。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述一種或多種熒光蛋白錨定到所述可溶脹材料。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述樣品通過加入水以溶脹所述可溶脹材料來各向同性地擴展。

10.根據權利要求3所述的方法，其中所述消化步驟包括使用LysC、高壓滅菌或蛋白酶K來處理所述樣品。

11.根據權利要求3所述的方法，其中所述消化是酶消化。

12.根據權利要求1所述的方法，其中至少一種蛋白質錨定到所述可溶脹材料。