[發(fā)明專利]用于評估接觸系統(tǒng)激活的含有蛋白酶抑制劑的真空采血管

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201680047254.6
• 申請日: 2016-08-12
• 公開（公告）號: CN108135547B
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D·J·塞克斯頓;萊恩·福賽特
• 申請（專利權(quán)）人: 武田藥品工業(yè)株式會社
• 主分類號: A61B5/154
• 分類號: A61B5/154;A61B5/15
• 代理公司: 北京市鑄成律師事務(wù)所 11313
• 代理人: 王建秀;郗名悅

本文公開了包含液體形式的蛋白酶抑制劑混合物的真空采血管和其用于評估與受試者的接觸系統(tǒng)相關(guān)的特征的用途，所述特征包括接觸系統(tǒng)激活的內(nèi)源水平、治療期間靶向接觸系統(tǒng)的組分的藥物的內(nèi)源水平和/或這樣的藥物的免疫原性。

相關(guān)申請的交叉引用

本申請要求2015年8月13日提交的美國臨時申請?zhí)?2/204,644和2015年9月4日提交的美國臨時申請?zhí)?2/214,308的申請日的益處。這些引用的申請各自的全部內(nèi)容通過引用并入本文。

背景技術(shù)

由于采血過程中離體激活的傾向，使用患者血漿精確測量接觸系統(tǒng)激活(contactsystem activation)的體內(nèi)水平面臨著挑戰(zhàn)。來自患有與接觸系統(tǒng)相關(guān)的某些疾病(例如，遺傳性血管性水腫)的患者的血液尤其傾向于離體接觸系統(tǒng)激活，因?yàn)槠淙狈υ撏緩降奶烊灰种苿狢1抑制劑。因此，測量途徑特異性生物標(biāo)志物(例如，2-鏈高分子量激肽原)可能高估了患者中存在的接觸系統(tǒng)激活的程度，除非血液被小心收集和加工。

發(fā)明內(nèi)容

本公開至少部分基于非玻璃真空采血管的開發(fā)，所述非玻璃真空采血管含有液體制劑中的蛋白酶抑制劑混合物(mixture)(混合物(cocktail))，其在采血過程中預(yù)防接觸系統(tǒng)的離體激活。因此，本文所述的真空采血管允許精確測量患者(尤其缺乏該途徑的天然抑制劑(例如，C1抑制劑)那些患者)的接觸系統(tǒng)激活的內(nèi)源水平。

因此，本公開的一個方面描述了一種真空采血管，其包含含有蛋白酶抑制劑的混合物的液體制劑，所述液體制劑可基本上不含在水溶液中不穩(wěn)定的蛋白酶抑制劑。所述管可以是非玻璃管。在一些實(shí)施方式中，所述管是塑料的。在一些實(shí)施方式中，真空采血管包含0.5ml的本文所述的任何液體制劑，其可在使用時被稀釋10倍。

在一些實(shí)施方式中，本文所述的真空采血管中的蛋白酶抑制劑的混合物包含至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑(例如，血漿激肽釋放酶抑制劑)和至少一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑。在一個實(shí)施例中，蛋白酶抑制劑的混合物包含EPI-KAL2(其可以是生物素化的)和亮抑酶肽。EPI-KAL2的含量的范圍可以是包含其的液體制劑中5至15μM。可選地或另外，液體制劑中亮抑酶肽的量的范圍可以是200至300μM。

在一些實(shí)施方式中，本文所述的蛋白酶抑制劑的混合物可包含至少兩種絲氨酸蛋白酶抑制劑，所述兩種絲氨酸蛋白酶抑制劑中的至少一種是胰蛋白酶抑制劑，例如，大豆胰蛋白酶抑制劑。在一些實(shí)施例中，蛋白酶抑制劑的混合物包含芐脒、大豆胰蛋白酶抑制劑、亮抑酶肽和AEBSF。在一些實(shí)施例中，真空采血管中的液體制劑可包含80-120mM芐脒、1-3mg/ml大豆胰蛋白酶抑制劑、200-300μM亮抑酶肽和/或10-30mM AEBSF。

本文所述的任何真空采血管中的液體制劑可進(jìn)一步包含聚凝胺和EDTA。在一些實(shí)施方式中，本文所述的任何液體制劑的pH可為4-6(例如，4.5)。

在另一方面中，本公開提供了用于評估受試者的接觸系統(tǒng)激活的內(nèi)源水平的方法。該方法包括：(i)將受試者的血液采集至本文所述的任何真空采血管中；(ii)加工血液以產(chǎn)生血漿樣品；和(iii)測量血漿樣品中接觸系統(tǒng)激活的水平。在一些實(shí)施方式中，測量步驟(步驟(iii))可通過測量指示接觸系統(tǒng)激活的一種或多種生物標(biāo)志物的水平來進(jìn)行。這類生物標(biāo)志物可包括前激肽釋放酶、活性血漿激肽釋放酶(pKal)、α2M-pKal復(fù)合物、活性因子XII、活性因子XI、高分子量激肽原(HMWK)和/或緩激肽代謝物。在一個實(shí)施例中，一種或多種生物標(biāo)志物包括切割的HMWK和/或完整的HMWK。

在仍另一方面中，本公開提供了用于評估靶向接觸系統(tǒng)的藥物在受試者中的水平的方法。該方法包括：(i)將受試者的血液采集至如本文所描述的真空采血管中，其中所述受試者被施用靶向接觸系統(tǒng)的組分的藥物；(ii)加工血液以產(chǎn)生血漿樣品；和(iii)測量血漿樣品中藥物的水平。