[發明專利]用于檢測Htert基因的啟動子中的突變的方法，序列，組合物和試劑盒

在審

• 申請號: 201680038603.8
• 申請日: 2016-05-02
• 公開（公告）號: CN109790580A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發明（設計）人: 安娜·保拉·蘇亞雷斯·迪亞斯·費雷拉;雨果·若奧·馬奎斯·普拉茲雷斯;卡塔里娜·米格爾·阿爾維斯·薩爾加多;魯伊·佩德羅·蒙泰羅·巴蒂斯塔;若奧·佩德羅·里科·德·奧利韋拉·比納格雷
• 申請（專利權）人: 艾帕特瑪普（波爾圖大學分子病理學和免疫學研究所）
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 王蕊;李軼

1.一組核苷酸序列，用于檢測基因hTERT的啟動子中的突變c.-124 C>T和/或c.-146 C>T，其特征在于其包含SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2和至少SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4和/或SEQ ID NO.5至SEQ ID NO.6。

2.一種用于PCR擴增和雜交的組合物，其用于檢測基因hTERT的啟動子中突變C.-124 C>T和/或c.-146 C>T，其特征在于除了用于PCR的試劑溶液之外，還包括權利要求1所述的核苷酸序列SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.2和至少SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.4和/或SEQ IDNO.5至SEQ ID NO.6。

3.根據前述權利要求的組合物，其特征在于SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6中的至少一種以400nm-1600nM的最終濃度存在于這種組合物中。

4.根據前述權利要求的組合物，其特征在于SEQ ID NO.3至SEQ ID NO.6核苷酸序列中的至少一種以800nm-1600nM的最終濃度存在于這種組合物中。

5.根據前述權利要求的組合物，其特征在于SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.5核苷酸序列以250nm-500nM最終濃度存在于這種組合物中，并且其特征在于SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.6核苷酸序列以800nm-1600nM的最終濃度存在于這種組合物中。

6.根據前述權利要求的組合物，其特征在于其包含以下濃度的SEQ ID NO.3至SEQ IDNO.6：

i)250nM-500nM的SEQ ID NO.3，400nm-1600nM的SEQ ID NO.4，250nM-500nM的SEQ IDNO.5和400nm-1600nM的SEQ ID NO.6，或者

ii)250nM-500nM的SEQ ID NO.3，800nm-1600nM的SEQ ID NO.4，250nM-500nM的SEQ IDNO.5和800nm-1600nM的SEQ ID NO.6。

7.一種用于檢測基因hTERT的啟動子中的突變c.-124 C>T和c.-146 C>T的組合物，其特征在于其除了獲自體外生物樣品的人類DNA之外，還包括至少一種如權利要求2-6中任一項所述的用于PCR擴增和雜交的組合物。

8.根據前述權利要求的組合物，其特征在于在所述組合物中，所包含的測試樣品的DNA的量的最終濃度小于500ng、小于100ng、小于50ng和大于1ng。

9.一種試劑盒，其用于檢測基因hTERT的啟動子中的突變c.-124 C>T和/或C.-146 C>T，其包含至少一種權利要求7-8中任一項所述的用于檢測突變的組合物。

10.根據前述權利要求的試劑盒，其特征在于其還包含至少一種DNA樣品，其含有基因hTERT的啟動子中的突變c.-124 C>T和/或c.-146 C>T。

11.一種用于檢測基因hTERT的啟動子中的突變c.-124 C>T和/或C.-146 C>T的體外方法，其特征在于包含以下步驟：

a)通過以下方式制備權利要求7-8中所述的用于檢測的組合物：促使從生物樣品提取的用于測試所述突變的DNA，與權利要求2-6中所述的用于PCR擴增和雜交的組合物進行接觸，

b)通過PCR反應來擴增和雜交檢測組合物的DNA樣品，

c)分析(b)中獲得的擴增曲線，和驗證熒光信號的指數擴增的存在，其對應于所分析的樣品中的基因hTERT啟動子的啟動子中c.-124 C>T突變和/或c.-146 C>T突變的存在呈陽性。