[發(fā)明專(zhuān)利]新抗微生物肽、它們的變體和用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201680038008.4
• 申請(qǐng)日: 2016-06-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107949568B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 特赫斯威·梅索維沙坎特高達(dá);安娜·瑪麗亞·皮爾蒂萊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 鏈狀抗菌劑公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/415
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/415;C07K14/47
• 代理公司: 中科專(zhuān)利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 吳小明

本發(fā)明涉及新型抗微生物肽及其變體。本發(fā)明還涉及殺死物生長(zhǎng)或抑制微生物生長(zhǎng)的方法以及本文公開(kāi)的肽作為藥物、飼料添加劑、防腐劑或表面活性劑的用途。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗微生物肽或其變體，涉及殺死微生物或抑制微生物生長(zhǎng)的方法，以及涉及本文所述的肽作為藥物、飼料添加劑、防腐劑或表面活性劑的用途。

背景技術(shù)

在藥物化合物中，抗生素對(duì)人類(lèi)的期望壽命產(chǎn)生了巨大的影響。然而，微生物發(fā)展抗性的能力幾乎是無(wú)限的。多藥耐藥性已經(jīng)成為許多人類(lèi)病原體的一個(gè)非常普遍和危險(xiǎn)的特征，并且耐藥性正在全球蔓延。

內(nèi)寄生菌是廣泛的次級(jí)代謝產(chǎn)物的有希望的生產(chǎn)者，在生物醫(yī)學(xué)、制藥和醫(yī)療行業(yè)具有潛在的應(yīng)用。典型地用于研究?jī)?nèi)寄生菌的功能多樣性的方法學(xué)是基于強(qiáng)調(diào)快速生長(zhǎng)的菌株的分離，因此不代表完整的生物多樣性。諸如變性梯度凝膠電泳(DGGE)、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)或克隆和直接測(cè)序的方法用于分析植物中不可培養(yǎng)的真菌菌落的多樣性，但是這樣的方法不適于功能研究。內(nèi)寄生菌的常見(jiàn)問(wèn)題是，它們?cè)隗w外僅在某段時(shí)間產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，然后變得無(wú)活性，失去生存力或產(chǎn)生生物活性次級(jí)代謝產(chǎn)物的能力。對(duì)其它微生物的這種培養(yǎng)問(wèn)題早已成為開(kāi)發(fā)新方法的驅(qū)動(dòng)力之一以獲取巨大微生物財(cái)富。

抗微生物肽(AMP)在所有復(fù)雜的生物體中都通過(guò)先天免疫系統(tǒng)在進(jìn)化上被保存和產(chǎn)生。它們?cè)谌祟?lèi)和哺乳動(dòng)物中作為第一道防線(xiàn)。AMP是由10-50個(gè)氨基酸構(gòu)成的多肽，具有≥30％的疏水比率和正電荷。通常，AMP對(duì)細(xì)菌、真菌和酵母具有廣譜的抗微生物活性。

WO 2011/113999公開(kāi)了來(lái)自巖高蘭(Empetrum nigrum)的內(nèi)寄生菌的胰蛋白酶多肽以及獲得它們的方法。基于經(jīng)由計(jì)算機(jī)(in silico)的分析，預(yù)測(cè)所述肽具有抗微生物活性。

迫切需要對(duì)各種病原微生物具有活性的新分子。如下所解釋的，本發(fā)明滿(mǎn)足了這些需求。

發(fā)明概述

巖高蘭(Crowberry)(Empetrum nigrum)是生長(zhǎng)在北半球的多年生灌木，其傳統(tǒng)上已經(jīng)用于治療傳染性疾病并且被認(rèn)為是這種研究的好的候選者。本發(fā)明提供了來(lái)源于巖高蘭的內(nèi)寄生菌的新型抗微生物(多)肽及其變體，其對(duì)各種微生物具有改善的活性。

本發(fā)明的第一方面是提供抗微生物肽或其變體。根據(jù)本發(fā)明，所述多肽包含SEQID NO:5或與SEQ ID NO:5具有至少37％的同一性。

本發(fā)明的第二方面是殺死微生物或抑制微生物生長(zhǎng)的方法。根據(jù)本發(fā)明，所述方法包括用本文所述的肽或其變體處理所述微生物的步驟。

本發(fā)明的第三方面是本文所述的肽或其變體作為藥物、飼料添加劑、防腐劑或表面活性劑的用途。

本發(fā)明獲得了相當(dāng)多的優(yōu)點(diǎn)。已知AMP對(duì)廣譜的微生物(包括真菌以及革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌二者)具有活性。由于生產(chǎn)成本最小，所以小AMP易于合成并具有商業(yè)可行性。未發(fā)現(xiàn)AMP在細(xì)菌中發(fā)展耐藥性。本發(fā)明涉及新型抗微生物肽，它們的變體和在各種應(yīng)用中的用途。

附圖簡(jiǎn)述

圖1.瓊脂覆層測(cè)定，其顯示在基于大腸桿菌的內(nèi)寄生菌宏基因組文庫(kù)中鑒定的對(duì)金黃色葡萄球菌(S.aureus)具有抗細(xì)菌活性的亞克隆(a)和不具有活性的亞克隆(s)。

圖2.巖高蘭宏基因組抗細(xì)菌蛋白1的預(yù)測(cè)氨基酸序列。預(yù)測(cè)蛋白具有549個(gè)殘基。高度保守的PPR序列(三角狀五肽(pentatricopeptide)重復(fù))是加下劃線(xiàn)的。

圖3.合成肽Met1-Met12(各100μg)的代表性徑向擴(kuò)散測(cè)定(RDA)，針對(duì)大腸桿菌(A)和金黃色葡萄球菌(B)測(cè)試，NC＝陰性對(duì)照，慶大霉素為10μg。

圖4a顯示由SEQ ID NO:4定義的“Met10”-肽(鏈100)的25個(gè)變體的比對(duì)。