[發明專利]固定化的聚(N)聚合酶

在審

• 申請號: 201680024902.6
• 申請日: 2016-05-02
• 公開（公告）號: CN107889503A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 蒂爾曼·魯斯;本雅明·亞茲丹·潘納;馬庫斯·康策爾曼;薇羅妮卡·瓦格納
• 申請（專利權）人: 庫瑞瓦格股份公司
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10;C12N11/06;C12M1/40;C12M1/34;C12M1/12
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙)11201
• 代理人: 宋融冰

1.一種聚(N)聚合酶，其特征在于所述聚(N)聚合酶是細菌聚(N)聚合酶并固定化在固體支持物上。

2.根據權利要求1所述的聚(N)聚合酶，其中所述聚(N)聚合酶選自由聚(A)聚合酶、聚(U)聚合酶、聚(G)聚合酶和聚(C)聚合酶所組成的組。

3.根據權利要求1或2所述的聚(N)聚合酶，其中所述聚(N)聚合酶是聚(A)聚合酶。

4.根據前述權利要求中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中通過共價結合、親和結合或物理吸附將所述聚(N)聚合酶固定化在所述固體支持物上。

5.根據前述權利要求中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中通過共價結合將所述聚(N)聚合酶固定化至所述固體支持物上。

6.根據前述權利要求中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中通過共價結合將所述聚(N)聚合酶固定化至巰基活化的固體支持物、鹵代乙酰基官能化的固體支持物、環氧基官能化的固體支持物、吡啶基二硫化物官能化的固體支持物、馬來酰亞胺活化的固體支持物或其混合物，優選地通過共價結合將所述聚(N)聚合酶固定化至巰基活化的固體支持物、鹵代乙酰基官能化的固體支持物、吡啶基二硫化物官能化的固體支持物、馬來酰亞胺活化的固體支持物或其混合物。

7.根據前述權利要求中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中經由至少一個半胱氨酸殘基的巰基基團將所述聚(N)聚合酶固定化。

8.根據權利要求4至7中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中所述共價結合是二硫橋鍵、硫酯鍵或硫醚鍵，優選所述共價結合是二硫橋鍵或硫醚鍵。

9.根據前述權利要求中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中所述固體支持物包含選自由瓊脂糖凝膠、硫丙基-瓊脂糖凝膠、葡聚糖、瓊脂糖、二氧化硅、磁性珠粒、甲基丙烯酸酯珠粒和納米顆粒所組成的組的成員，優選地，所述固體支持物包含選自由瓊脂糖凝膠、硫丙基-瓊脂糖凝膠、葡聚糖、瓊脂糖、二氧化硅、磁性珠粒和納米顆粒所組成的組的成員。

10.根據前述權利要求中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中所述固體支持物包含選自由巰基、鹵代乙酰基、吡啶基二硫化物、環氧基、馬來酰亞胺及其混合物所組成的組的反應性基團。

11.根據前述權利要求中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中所述固體支持物選自由活化的巰基瓊脂糖凝膠、硫丙基-瓊脂糖凝膠、巰基活化的葡聚糖、巰基活化的瓊脂糖、二氧化硅基的巰基活化的基質、二氧化硅基的巰基活化的磁性珠粒、吡啶基二硫化物官能化納米顆粒、馬來酰亞胺活化的瓊脂糖及其混合物所組成的組。

12.根據前述權利要求中任一項所述的聚(N)聚合酶，其中所述聚(N)聚合酶源自大腸桿菌(Escherichia coli)、天藍色鏈霉菌(Streptomyces coelicolor)、亞棲熱菌屬silvanus(Meiothermus silvanus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、棲熱水生菌(Thermus aquaticus)、弗氏志賀菌(Shigella flexneri)、痢疾志賀菌(Shigella dysenteriae)、克氏檸檬酸桿菌(Citrobacter koseri)、邦戈沙門氏菌(Salmonella bongori)、腸道沙門氏菌(Salmonella enterica)、關島特布爾西氏菌(Trabulsiella guamensis)、抗壞血酸克呂沃爾菌(Kluyvera ascorbata)、弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacter freundii)、陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)、鶉雞腸球菌(Enterococcus gallinarum)、印度格里蒙菌(Grimontia indica)或肋生鹽弧菌(Salinivibrio costicola)。