[發明專利]生產酵母突變體的方法及其用途

在審

• 申請號: 201680009586.5
• 申請日: 2016-02-04
• 公開（公告）號: CN107820517A
• 公開（公告）日: 2018-03-20
• 發明（設計）人: J·弗洛里奇;J·埃克;G·穆勒;C·諾摩爾;J·布什切爾;J·邁姆佩爾
• 申請（專利權）人: 德國愛普斯樂集團;布萊恩股份公司
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C12N1/19;C12G1/022;C12R1/865
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司31100
• 代理人: 陳揚揚,陶家蓉

1.產生酵母突變體的方法，其中至少一個酵母株在第一誘變步驟中與第一誘變劑接觸并且在第二誘變步驟中與第二誘變劑接觸，所述方法的特征在于

-所述第一和第二誘變劑互相不同并且選自下組：

核苷酸-烷基化劑、核苷酸-脫氨基劑和UV輻射，并且

-第一選擇步驟在所述第一和第二誘變步驟之間進行且第二選擇步驟在所述第二誘變步驟之后進行，其中使來自在先誘變步驟的突變體暴露于選自下組的選擇因素：

(a)高滲培養基和

(b)醇-脫氫酶抑制劑。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酸-烷基化劑選自以下：硫酸二甲酯(DMS)，甲磺酸乙酯(EMS)，甲磺酸甲酯(MMS)，1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(MNNG)，甲基亞硝基氰胺(MNC)，甲基亞硝基脲(MNU)和DNA甲基轉移酶。

3.如權利要求1和2中任一項所述的方法，其特征在于，所述核苷酸-脫氨基劑選自以下：無機亞硝酸鹽、有機亞硝酸鹽和亞硝酸。

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于，所述第一誘變劑是核苷酸-烷基化劑或核苷酸-脫氨基劑。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于，所述第一誘變劑是核苷酸-烷基化劑并且所述第二誘變劑是核苷酸-脫氨基劑或UV輻射。

6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于，通過加入以下物質之一獲得所述高滲培養基：以下的氯化物和硫酸鹽：鈉，鉀，鎂，鈣，和糖，包括果糖和葡萄糖，以及糖醇，包括山梨糖醇和甘露醇。

7.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于，所述醇脫氫酶抑制劑選自以下：吡唑、3-甲基吡唑、4-甲基吡唑和乙酰水楊酸。

8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，其特征在于，所述選擇因素之一選自組(a)并且所述選擇因素之一選自組(b)。

9.如權利要求1-8中任一項所述的方法，其特征在于，在所述第一選擇步驟之后進行測試步驟，其中測試在所述第一選擇步驟之后獲得的中間酵母突變體是否在相同條件下與初始使用的酵母株相比在乙醇發酵過程中產生更多的甘油，由此僅對符合該標準的中間酵母突變體進行所述第二誘變步驟和所述第二選擇步驟。

10.通過如權利要求1-9中任一項所述的方法獲得并且以保藏號DSM29822保藏在德國微生物菌種保藏中心的酵母突變體。

11.通過如權利要求1-9中任一項所述的方法獲得酵母突變體，其特征在于，在90°Oe(21.6％白利度)和NOPA值＝107mg/l的汁以4x10⁶/ml的劑量發酵期間，在15-25℃的發酵溫度下35天后，所述突變體產生具有以下比例的乙醇和甘油的葡萄酒：

乙醇 70-150g/l

甘油 10-20g/l。

12.通過如權利要求1-9中任一項所述的方法獲得酵母突變體，或如權利要求10所述的酵母突變體，或如權利要求11所述的酵母突變體在生產酒精飲料的方法中的用途。

13.如權利要求12所述的用途，其特征在于，所述酒精飲料由葡萄汁產生。