[發明專利]干細胞細胞因子的制備方法及其抗體聯用的制藥用途

有效

• 申請號: 202210836363.3
• 申請日: 2022-07-15
• 公開（公告）號: CN116063478B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 王正好;趙理
• 申請（專利權）人: 珠海鳳凰高科生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00;A61K8/99;A61K8/64;A61Q19/02;A61K35/36
• 代理公司: 北京云嘉湃富知識產權代理有限公司 11678
• 代理人: 陳順華

本發明涉及干細胞細胞因子的制備方法及其抗體聯用的制藥用途。本發明開發了一種特異性針對人BRD4蛋白的單克隆抗體，該抗體能夠抑制癌細胞克隆形成以及影響細胞活力，通過與干細胞細胞因子聯用后能夠達到抑制癌細胞腫瘤生長的效果，具有較好的應用前景。

技術領域

本申請涉及生物領域，還涉及干細胞細胞因子的制備方法及其抗體聯用的制藥用途。

背景技術

惡性黑色素瘤(malignant?melanoma)是起源于胚胎期神經嵴的惡性腫瘤，其惡性度極高，預后較差。可發生于皮膚、眼球、消化道、生殖系統等部位，但其中以皮膚惡性黑色素瘤最常見。由于惡性黑色素瘤惡性度高，易于早期轉移，即使早期進行根治手術，患者5年生存率也低于70％。免疫靶向治療與傳統化學療法相比優勢明顯，因而日益成為治療惡性腫瘤的新方向。

嵌合抗原受體(chimericantigenreceptors，CAR)是-種重組抗原受體，具有結合抗原并激活T細胞的功能。利用HERV-K的腫瘤特異性，于T細胞表面設計相關CAR，發現CAR-T可特異性識別HERV-K并與其結合，發揮抗腫瘤作用。惡性黑色素瘤早期即可通過血液轉移，傳統的手術切除、化學療法、放射療法的效果不佳，預臨床試驗數據顯示，嵌合HERV-K受體的T細胞(CAR-T)可準確作用于表達HERV-K的腫瘤細胞表面，并殺傷腫瘤細胞。由于HERV-K在正常細胞表面無表達，其特異性表達于HIV、白血病及多種腫瘤細胞表面，因此，嵌合HERV-K受體的T細胞可用于多種腫瘤的治療。

外泌體作為-種可以包裹藥物的載體以及治療藥物，近年來也被用于腫瘤的靶向治療以及單獨治療使用。外泌體是經細胞分泌產生的-種自然產物，它具有低免疫原性、無毒副作用；且來源廣，具有磷脂雙分子層結構，易于與靶細胞的細胞膜融合；分子結構小，分子量為納米級(10-100nm)，可避免單核細胞的吐噬作用，且易于穿透腫瘤組織毛細血管向深層組織浸潤。現有試驗發現，由內皮細胞及干細胞分泌的外泌體作為抗腫瘤藥物的載體，其優勢明顯、不良反應小。經未成熟樹突狀細胞(imDCs)分泌的外泌體因缺乏CD40、CD86、MHC-I、MHC-II等表面標志物，免疫原性低，且imDCs-外泌體表面表達糖蛋白(Lamp2b)，這種表面蛋白融合了iRGD靶向蛋白，可特異性識別腫瘤細胞表面的V整合素。目前，臨床上許多抗腫瘤藥物因劑量依賴性而應用受限，如阿霉素對多種腫瘤均有抑制作用，但因其對心血管具有劑量依賴性而限制其應用[271。劑量依賴性產生的原因主要是藥物缺乏特異性作用于腫瘤細胞的載體，而廣泛作用于正常細胞引起。利用外泌體的靶向結合作用，可以將阿霉素等藥物直接作用于腫瘤細胞，從而減少對正常細胞造成的損傷。通過基因轉染技術過表達iRGD就可以得到大量攜帶iRGD的外泌體。基于這-原理，將阿霉素整合到imDCs-外泌體中，發現融合iRGD靶向蛋白的外泌體能特異性作用于表達V整合素的乳腺腫瘤細胞，使外泌體通過胞吐釋放阿霉素，在體內充分發揮抗腫瘤作用。而且單獨使用外泌體來治療癌癥也是目前研究的重要方向。